[發明專利]一種純化重組谷氨酰胺轉氨酶的方法

在審

• 申請號: 201811647903.3
• 申請日: 2018-12-30
• 公開（公告）號: CN109593741A
• 公開（公告）日: 2019-04-09
• 發明（設計）人: 史百鳴;王運龍;盧雪峰;李國瑩;陸瑞琪
• 申請（專利權）人: 江蘇一鳴生物股份有限公司
• 主分類號: C12N9/10
• 分類號: C12N9/10;C07K19/00;C07K1/22
• 代理公司: 蘇州國卓知識產權代理有限公司 32331
• 代理人: 明志會

本發明涉及提純技術領域，尤其是一種純化重組谷氨酰胺轉氨酶的方法，包括以下步驟；步驟一、在重組谷氨酰轉氨酶時，在重組谷氨酰轉氨的酶的C端添加組氨酸標簽；步驟二、使目的蛋白谷氨酰胺轉氨酶結合在鎳離子親和柱中的填料上；步驟三、使用A溶液沖洗步驟二得到的溶液至基線平衡，除去填料中的非目的蛋白；步驟四、使用B溶液洗脫步驟三得到的溶液的目的蛋白；步驟五、將步驟四得到的蛋白洗脫液中含有的氯化鈉和咪唑采用透析的方式除去，本發明使用鎳離子交換柱純化被體外活化的谷氨酰胺轉氨酶對洗脫酶液，使用透析法脫去鹽離子，處理條件溫和，蛋白損失小，可以提高谷氨酰胺轉氨酶的回收率，增加回收酶液的純度。

技術領域

本發明涉及提純技術領域，尤其涉及一種純化重組谷氨酰胺轉氨酶的方法。

背景技術

谷氨酰胺轉氨酶又稱轉谷氨酰胺酶（TG酶）是由331個氨基組成的分子量約38000的具有活性中心的單體蛋白質，其可催化蛋白質多肽發生分子內和分子間發生共價交聯，從而改善蛋白質的結構和功能，對蛋白質的性質如：發泡性，乳化性，乳化穩定性，熱穩定性、保水性和凝膠能力等效果顯著，進而改善食品的風味、口感、質地和外觀等，傳統肉類加工工藝通常加入大量的鹽和磷酸，以提高其持水力、連貫性和質地，近期，少鹽少磷酸的食物被廣泛推廣，但其質地和物理性質都不盡如人意，TG酶可以替代部分通常肉制品加工中添加的品質改良劑—磷酸鹽，生產低鹽肉制品，可應用于水產加工品、火腿、香腸、面類、豆腐等等；

現有技術的純化谷氨酰胺轉氨酶的方法多為使用離子交換色譜進行分離，存在回收率低，酶的濃度會被稀釋，導致谷氨酰胺轉氨酶的純度較低，適用范圍較低。

發明內容

本發明的目的在于提供一種純化重組谷氨酰胺轉氨酶的方法，以解決上述背景技術中提出的問題。

為了實現上述目的，本發明采用了如下技術方案：

設計一種純化重組谷氨酰胺轉氨酶的方法，包括以下步驟；

步驟一、在重組谷氨酰轉氨酶時，在重組谷氨酰轉氨的酶的C端添加組氨酸標簽；

步驟二、使目的蛋白谷氨酰胺轉氨酶結合在鎳離子親和柱中的填料上，填料的蛋白結合能力是35-45mg蛋白/ml填料；

步驟三、使用A溶液沖洗步驟二得到的溶液至基線平衡，除去填料中的非目的蛋白；

步驟四、使用B溶液洗脫步驟三得到的溶液的目的蛋白，并收集UV280的峰處對應的洗脫液；

步驟五、將步驟四得到的蛋白洗脫液中含有的氯化鈉和咪唑采用透析的方式除去；

S1、將得到的蛋白洗脫液加入透析袋中在透析液的驅使下進行透析，其中蛋白洗脫液與透析液的體積比例為1:100；

S2、第一次更換透析液，透析開始后2-4小時更換；

S3、第二次更換透析液，透析開始后5-6小時更換；

S4、第三次更換透析液，直至透析20-24小時結束。

優選的，步驟三中，所述A溶液為平衡液，其成分是20mM，pH=7.4的KH2PO4-K2HPO4緩沖液，100mM NaCl，20mM 咪唑。

優選的，步驟四中，所述B溶液為洗脫液，其成分是20mM，pH=7.4的KH2PO4-K2HPO4緩沖液，100mM NaCl，300mM 咪唑。

優選的，步驟五中，所述透析袋的規格是14kDa，所述透析液的成分是20mM，pH=7.4的KH2PO4-K2HPO4緩沖液。

本發明提出的一種純化重組谷氨酰胺轉氨酶的方法，有益效果在于：