[發明專利]一種純化重組谷氨酰胺轉氨酶的方法在審
| 申請號： | 201811647903.3 | 申請日： | 2018-12-30 |
| 公開（公告）號： | CN109593741A | 公開（公告）日： | 2019-04-09 |
| 發明（設計）人： | 史百鳴;王運龍;盧雪峰;李國瑩;陸瑞琪 | 申請（專利權）人： | 江蘇一鳴生物股份有限公司 |
| 主分類號： | C12N9/10 | 分類號： | C12N9/10;C07K19/00;C07K1/22 |
| 代理公司： | 蘇州國卓知識產權代理有限公司 32331 | 代理人： | 明志會 |
| 地址： | 225432 *** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 谷氨酰胺轉氨酶 目的蛋白 酶液 洗脫 氯化鈉 鎳離子親和柱 蛋白洗脫液 離子交換柱 組氨酸標簽 轉氨酶 蛋白損失 提純技術 透析法 鹽離子 被體 活化 基線 透析 脫去 咪唑 回收率 沖洗 回收 平衡 | ||
1.一種純化重組谷氨酰胺轉氨酶的方法，其特征在于，包括以下步驟；
步驟一、在重組谷氨酰轉氨酶時，在重組谷氨酰轉氨的酶的C端添加組氨酸標簽；
步驟二、使目的蛋白谷氨酰胺轉氨酶結合在鎳離子親和柱中的填料上，填料的蛋白結合能力是35-45mg蛋白/ml填料；
步驟三、使用A溶液沖洗步驟二得到的溶液至基線平衡，除去填料中的非目的蛋白；
步驟四、使用B溶液洗脫步驟三得到的溶液的目的蛋白，并收集UV280的峰處對應的洗脫液；
步驟五、將步驟四得到的蛋白洗脫液中含有的氯化鈉和咪唑采用透析的方式除去；
S1、將得到的蛋白洗脫液加入透析袋中在透析液的驅使下進行透析，其中蛋白洗脫液與透析液的體積比例為1:100；
S2、第一次更換透析液，透析開始后2-4小時更換；
S3、第二次更換透析液，透析開始后5-6小時更換；
S4、第三次更換透析液，直至透析20-24小時結束。
2. 根據權利要求1所述的一種純化重組谷氨酰胺轉氨酶的方法，其特征在于：步驟三中，所述A溶液為平衡液，其成分是20mM，pH=7.4的KH2PO4-K2HPO4緩沖液，100mM NaCl，20mM咪唑。
3. 根據權利要求1所述的一種純化重組谷氨酰胺轉氨酶的方法，其特征在于：步驟四中，所述B溶液為洗脫液，其成分是20mM，pH=7.4的KH2PO4-K2HPO4緩沖液，100mM NaCl，300mM 咪唑。
4.根據權利要求1所述的一種純化重組谷氨酰胺轉氨酶的方法，其特征在于：步驟五中，所述透析袋的規格是14kDa，所述透析液的成分是20mM，pH=7.4的KH2PO4-K2HPO4緩沖液。
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