[發明專利]一種檢測猴G-CSF的酶聯免疫試劑盒

在審

• 申請號: 201811647660.3
• 申請日: 2018-12-29
• 公開（公告）號: CN109870571A
• 公開（公告）日: 2019-06-11
• 發明（設計）人: 畢利軍;朱國峰;張曉莉;溫姌婷;姚青青;李燕;黃健樂;蘇欣瑩
• 申請（專利權）人: 廣東云天抗體生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N33/53;G01N33/531;G01N33/535;G01N33/577;G01N33/569;G01N33/536;G01N21/31
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 馮振寧

本發明公開了一種檢測猴G?CSF的雙抗夾心酶聯免疫試劑盒，包括由捕獲抗體包被的酶標板、檢測抗體、稀釋液、濃縮洗滌液、偶聯物、顯色液、終止液和標準品；其中，捕獲抗體為G?CSF的單克隆抗體；檢測抗體為生物素標記的G?CSF多克隆抗體；稀釋液為0.5～2%干酪素鈉的pH7.4磷酸緩沖液；捕獲抗體包被在酶標板上，以質量分數1～4%干酪素鈉的pH7.4磷酸緩沖液作為封閉液進行抗體封閉；標準品為G?CSF蛋白。本發明采用三明治法半定量ELISA的檢測樣品的G?CSF的水平，檢測方法操作簡單，結果準確度高，能夠檢測大批量的樣品。適用于科研領域非臨床診斷目的的針對猴G?CSF的特異性檢測，有很大的推廣應用價值。

技術領域

本發明涉及生物體外診斷技術領域，更具體地，涉及一種檢測猴G-CSF的酶聯免疫試劑盒。

背景技術

集落刺激因子(Colony stimulating factor，CSF)，是一類可刺激不同的造血干細胞在半固體培養基中形成細胞集落的細胞因子。根據集落刺激因子的作用范圍，分別命名為粒細胞CSF(G-CSF)，巨噬細胞CSF(M-CSF)，粒細胞和巨噬細胞CSF(GM-CSF)和多能集落刺激因子(multi-CSF，又稱IL-3)。它們對不同發育階段的造血干細胞起促增殖、分化的作用，是血細胞發生必不可少的刺激因子。粒細胞集落刺激因子(G-CSF)主要由內毒素、TNF-α和IFN-γ可活化單核細胞和巨噬細胞產生，具有刺激粒系母細胞的增殖和分化，并可增強成熟粒細胞功能的作用。它在抗感染的非特異性細胞免疫過程中起重要作用。當化膿菌或其毒素侵人人體時，G-CSF在血清或體液中迅速升高，并在感染得到控制后又降至正常水平。在科研領域，非臨床診斷目的的粒細胞集落刺激因子(G-CSF)檢測有著很大的市場前景。

但是，目前市場上尚適用于科研領域非臨床診斷目的的針對猴G-CSF的特異性檢測試劑盒，缺乏一種操作簡單、檢測靈敏度高、準確性強的猴G-CSF的酶聯免疫試劑盒。

發明內容

本發明的目的是為了克服現有技術的缺乏一種操作簡單、檢測靈敏度高、準確性強的猴G-CSF的酶聯免疫試劑盒不足，提供一種操作簡單、檢測靈敏度高、準確性強的猴G-CSF的酶聯免疫試劑盒。

為了實現上述目的，本發明是通過以下技術方案予以實現的：

本發明的技術方案是將捕獲抗體包被于酶標板，加入檢測抗體和G-CSF蛋白后，形成捕獲抗體、抗原和檢測抗體的復合物。待加入偶聯物和顯色液后，終止反應并讀取樣品的吸光值。通過與標準曲線比較計算得到待測樣品中的G-CSF的含量。

一種檢測猴G-CSF的雙抗夾心酶聯免疫試劑盒，包括由捕獲抗體包被的酶標板、檢測抗體、稀釋液、濃縮洗滌液、偶聯物、顯色液、終止液和標準品；

其中，捕獲抗體為G-CSF的單克隆抗體；

檢測抗體為生物素標記的G-CSF多克隆抗體；

稀釋液為0.5～2％干酪素鈉的pH7.4磷酸緩沖液；

捕獲抗體包被在酶標板上，以質量分數1～4％干酪素鈉的pH7.4磷酸緩沖液作為封閉液進行抗體封閉；

標準品為G-CSF蛋白。

優選地，捕獲抗體為抗人G-CSF的單克隆抗體。

優選地，檢測抗體為生物素標記的G-CSF羊多克隆抗體。

G-CSF蛋白為NCBI Reference Sequence：XP_001095097.1。

G-CSF蛋白為大腸桿菌表達的G-CSF。

優選地，標準品為G-CSF蛋白凍干品。

優選地，捕獲抗體G-CSF抗原包被在酶標板上，包括以下步驟：