[發(fā)明專利]一種檢測(cè)猴G-CSF的酶聯(lián)免疫試劑盒

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811647660.3
• 申請(qǐng)日: 2018-12-29
• 公開（公告）號(hào): CN109870571A
• 公開（公告）日: 2019-06-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 畢利軍;朱國峰;張曉莉;溫姌婷;姚青青;李燕;黃健樂;蘇欣瑩
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣東云天抗體生物科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/543
• 分類號(hào): G01N33/543;G01N33/53;G01N33/531;G01N33/535;G01N33/577;G01N33/569;G01N33/536;G01N21/31
• 代理公司: 廣州粵高專利商標(biāo)代理有限公司 44102
• 代理人: 馮振寧

1.一種檢測(cè)猴G-CSF的雙抗夾心酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征在于，包括由捕獲抗體包被的酶標(biāo)板、檢測(cè)抗體、稀釋液、濃縮洗滌液、偶聯(lián)物、顯色液、終止液和標(biāo)準(zhǔn)品；

其中，捕獲抗體為G-CSF的單克隆抗體；

檢測(cè)抗體為生物素標(biāo)記的G-CSF多克隆抗體；

稀釋液為0.5～2%干酪素鈉的pH7.4磷酸緩沖液；

捕獲抗體包被在酶標(biāo)板上，以質(zhì)量分?jǐn)?shù)1～4%干酪素鈉的pH7.4磷酸緩沖液作為封閉液進(jìn)行抗體封閉；

標(biāo)準(zhǔn)品為G-CSF蛋白。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙抗夾心酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征在于，捕獲抗體G-CSF抗原包被在酶標(biāo)板上，包括以下步驟：

S11. 用pH9.4磷酸鹽緩沖液將捕獲抗體稀釋，加入酶標(biāo)板，預(yù)包被；

S12. 用含有體積分?jǐn)?shù)0.01～0.2%吐溫20的pH7.4的PBS洗滌S1包被后的酶標(biāo)板；

S13. 拍干，加入封閉液，封閉；

S14. 拍干，干燥，真空包裝，保存。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙抗夾心酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征在于，捕獲抗體的包被濃度為0. 625～5μg/ml，包被量為50～300μL。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的雙抗夾心酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征在于，捕獲抗體的包被濃度為2.5μg/ml，包被量為100μL。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙抗夾心酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征在于，檢測(cè)抗體的使用濃度為0.25～2μg/ml，使用量為50～300μL。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的雙抗夾心酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征在于，檢測(cè)抗體的使用濃度為1μg/ml，使用量為50μL。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙抗夾心酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征在于，濃縮洗滌液為含有體積分?jǐn)?shù)1～4%的吐溫的pH7.4的磷酸鹽緩沖液，工作濃度需要稀釋20倍。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙抗夾心酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征在于，偶聯(lián)物為辣根過氧化酶標(biāo)記的鏈霉親和素；顯色液為四甲基聯(lián)苯胺；終止液為硫酸。

9.權(quán)利要求1～8任一所述的雙抗夾心酶聯(lián)免疫試劑盒的使用方法，其特征在于，包括以下步驟：

S21. 向酶標(biāo)板中加入檢測(cè)抗體；

S22. 將用稀釋液梯度稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣本分別加入對(duì)應(yīng)的孔內(nèi)，振蕩混勻，室溫孵育；

S23. 用洗滌液洗滌酶標(biāo)板；

S24. 加入偶聯(lián)物，振蕩混勻，室溫孵育；

S25. 用洗滌液洗滌酶標(biāo)板；

S26. 加入顯色液，振蕩混勻，室溫避光顯色；

S27. 加入終止液，終止反應(yīng)；

S28. 分別檢測(cè)450nm及620nm的OD值，計(jì)算其差值；

S29. 以O(shè)D₄₅₀與OD₆₂₀的差值為縱坐標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo)，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線和線性回歸方程式；

S210. 將待測(cè)樣本的OD₄₅₀與OD₆₂₀的差值帶入線性回歸方程式，計(jì)算其濃度。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的使用方法，其特征在于，標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣本的量為50～300μL/孔。