[發明專利]一種檢測猴IL-18的酶聯免疫試劑盒

在審

• 申請號: 201811647624.7
• 申請日: 2018-12-29
• 公開（公告）號: CN109870570A
• 公開（公告）日: 2019-06-11
• 發明（設計）人: 畢利軍;朱國峰;張曉莉;溫姌婷;姚青青;李燕;黃健樂;蘇欣瑩
• 申請（專利權）人: 廣東云天抗體生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N33/53;G01N33/531;G01N33/535;G01N33/577;G01N33/569;G01N33/536;G01N21/31
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 馮振寧

一種檢測猴IL?18的雙抗夾心酶聯免疫試劑盒，包括由捕獲抗體包被的酶標板、檢測抗體、稀釋液、濃縮洗滌液、偶聯物、顯色液、終止液和標準品；其中，捕獲抗體為IL?18的單克隆抗體；檢測抗體為生物素標記的IL?18多克隆抗體；稀釋液為0.5～4%干酪素鈉的pH7.4磷酸緩沖液；捕獲抗體包被在酶標板上，以質量分數1～5%牛血清白蛋白的pH7.4磷酸緩沖液作為封閉液進行抗體封閉；標準品為IL?18蛋白。本發明采用三明治法半定量ELISA的檢測樣品的IL?18的水平，檢測方法操作簡單，結果準確度高，能夠檢測大批量的樣品。適用于科研領域非臨床診斷目的的針對猴IL?18的特異性檢測，有很大的推廣應用價值。

技術領域

本發明涉及生物體外診斷技術領域，更具體地，涉及一種檢測猴IL-18的酶聯免疫試劑盒。

背景技術

IL-18由巨噬細胞和其他細胞產生，屬于IL-1配體家族，結構與IL-1蛋白家族相似。IL-18cDNA編碼193個氨基酸，半胱氨酸天冬酶在N端將其水解為成熟的IL-18，發揮其生物學活性。它是一個前炎癥因子，可調節多種細胞發育及細胞因子分泌。研究表明，它是獨特的依賴細胞因子周圍環境而刺激Thl和Th2細胞反應的細胞因子。能促進外周單個核細胞產生IFN-γ、IL-2和粒細胞巨噬細胞集落刺激因子等細胞因子，增強NK細胞和Thl細胞的細胞毒作用，促進T細胞的增殖，并在Thl細胞分化和免疫反應中有促進和調節作用。在免疫調節、抗感染、抗腫瘤及慢性炎癥性疾病發病過程中起著重要作用。在科研領域，非臨床診斷目的的IL-18檢測有著很大的市場前景。

但是，目前市場上尚適用于科研領域非臨床診斷目的的針對猴IL-18的特異性檢測試劑盒，缺乏一種操作簡單、檢測靈敏度高、準確性強的猴IL-18的酶聯免疫試劑盒。

發明內容

本發明的目的是為了克服現有技術的缺乏一種操作簡單、檢測靈敏度高、準確性強的猴IL-18的酶聯免疫試劑盒不足，提供一種操作簡單、檢測靈敏度高、準確性強的猴IL-18的酶聯免疫試劑盒。

為了實現上述目的，本發明是通過以下技術方案予以實現的：

本發明的技術方案是將捕獲抗體包被于酶標板，加入檢測抗體和IL-18蛋白后，形成捕獲抗體、抗原和檢測抗體的復合物。待加入偶聯物和顯色液后，終止反應并讀取樣品的吸光值。通過與標準曲線比較計算得到待測樣品中的IL-18的含量。

一種檢測猴IL-18的雙抗夾心酶聯免疫試劑盒，其特征在于，包括由捕獲抗體包被的酶標板、檢測抗體、稀釋液、濃縮洗滌液、偶聯物、顯色液、終止液和標準品；

其中，捕獲抗體為IL-18的單克隆抗體；

檢測抗體為生物素標記的IL-18多克隆抗體；

稀釋液為0.5～4％干酪素鈉的pH7.4磷酸緩沖液；

捕獲抗體包被在酶標板上，以質量分數1～5％牛血清白蛋白的pH7.4磷酸緩沖液作為封閉液進行抗體封閉；

標準品為IL-18蛋白。

優選地，捕獲抗體為抗人IL-18的單克隆抗體。

優選地，檢測抗體為生物素標記的IL-18小鼠多克隆抗體。

IL-18蛋白為NCBI Reference Sequence:NP_001028006.1。

IL-18蛋白為大腸桿菌表達的IL-18。

優選地，標準品為IL-18蛋白凍干品。

優選地，捕獲抗體包被在酶標板上，包括以下步驟：

S11.用pH9.4磷酸鹽緩沖液將捕獲抗體稀釋，加入酶標板，預包被；