[發明專利]一種檢測猴IL-18的酶聯免疫試劑盒

在審

• 申請號: 201811647624.7
• 申請日: 2018-12-29
• 公開（公告）號: CN109870570A
• 公開（公告）日: 2019-06-11
• 發明（設計）人: 畢利軍;朱國峰;張曉莉;溫姌婷;姚青青;李燕;黃健樂;蘇欣瑩
• 申請（專利權）人: 廣東云天抗體生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N33/53;G01N33/531;G01N33/535;G01N33/577;G01N33/569;G01N33/536;G01N21/31
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 馮振寧

1.一種檢測猴IL-18的雙抗夾心酶聯免疫試劑盒，其特征在于，包括由捕獲抗體包被的酶標板、檢測抗體、稀釋液、濃縮洗滌液、偶聯物、顯色液、終止液和標準品；

其中，捕獲抗體為IL-18的單克隆抗體；

檢測抗體為生物素標記的IL-18多克隆抗體；

稀釋液為0.5～4%干酪素鈉的pH7.4磷酸緩沖液；

捕獲抗體包被在酶標板上，以質量分數1～5%牛血清白蛋白的pH7.4磷酸緩沖液作為封閉液進行抗體封閉；

標準品為IL-18蛋白。

2.根據權利要求1所述的雙抗夾心酶聯免疫試劑盒，其特征在于，捕獲抗體包被在酶標板上，包括以下步驟：

S11. 用pH9.4磷酸鹽緩沖液將捕獲抗體稀釋，加入酶標板，預包被；

S12. 用含有體積分數0.01～0.2%吐溫20的pH7.4的PBS洗滌S11包被后的ELISA酶標板；

S13. 拍干，加入封閉液，封閉；

S14. 拍干，干燥，真空包裝，保存。

3.根據權利要求1所述的雙抗夾心酶聯免疫試劑盒，其特征在于，捕獲抗體的包被濃度為0. 5～4μg/ml，包被量為50～300μL。

4.根據權利要求3所述的雙抗夾心酶聯免疫試劑盒，其特征在于，捕獲抗體的包被濃度為1g/ml，包被量為100μL。

5.根據權利要求1所述的雙抗夾心酶聯免疫試劑盒，其特征在于，檢測抗體的使用濃度為0.25～2μg/ml，使用量為50～300μL。

6.根據權利要求5所述的雙抗夾心酶聯免疫試劑盒，其特征在于，檢測抗體的使用濃度為0.5μg/ml，使用量為50μL。

7.根據權利要求1所述的雙抗夾心酶聯免疫試劑盒，其特征在于，濃縮洗滌液為含有體積分數0.01～0.2%的吐溫的pH7.4的磷酸鹽緩沖液，工作濃度需要稀釋20倍。

8.根據權利要求1所述的雙抗夾心酶聯免疫試劑盒，其特征在于，偶聯物為辣根過氧化酶標記的鏈霉親和素；顯色液為四甲基聯苯胺；終止液為硫酸。

9.權利要求1～8任一所述的雙抗夾心酶聯免疫試劑盒的使用方法，包括以下步驟：

S21. 向酶標板，加入檢測抗體；

S22. 將用稀釋液梯度稀釋的標準品和待測樣本分別加入對應的孔內，振蕩混勻，室溫孵育；

S23. 用洗滌液洗滌酶標板；

S24. 加入偶聯物，振蕩混勻，室溫孵育；

S25. 用洗滌液洗滌酶標板；

S26. 加入顯色液，振蕩混勻，室溫避光顯色；

S27. 加入終止液，終止反應；

S28. 分別檢測450nm及620nm的OD值，計算其差值；

S29. 以OD₄₅₀與OD₆₂₀的差值為縱坐標，以標準品的濃度為橫坐標，得到標準曲線和線性回歸方程式；

S210. 將待測樣本的OD₄₅₀與OD₆₂₀的差值帶入線性回歸方程式，計算其濃度。

10.根據權利要求9所述的使用方法，其特征在于，標準品或待測樣本的量為50～300μL/孔。