[發明專利]一種模塊化制備化學小分子探針的方法及應用

在審

• 申請號: 201811647316.4
• 申請日: 2018-12-29
• 公開（公告）號: CN109796407A
• 公開（公告）日: 2019-05-24
• 發明（設計）人: 苗志偉;蔡巖;孫波;王學
• 申請（專利權）人: 鼎元（天津）生物醫藥科技有限公司
• 主分類號: C07D229/02
• 分類號: C07D229/02;C07C247/04;C09B57/00;C09K11/06
• 代理公司: 天津企興智財知識產權代理有限公司 12226
• 代理人: 韓敏

1.一種模塊化制備化學小分子探針的方法，其特征在于：化學小分子探針一般包括四個功能部位：結合基團、光親和標記基團、連接部位和報告基團；所述結合基團使探針分子與靶點作用，而不與環境中的其他生物分子作用；所述光親和標記基團能夠將探針分子共價修飾在靶點蛋白上；所述連接部位能夠保持分子活性及提高標記效率；所述報告基團能夠簡單快速識別或純化被標記蛋白；所述結合基團通過具體藥物確定，所述光親和標記基團、連接部位和報告基團能夠通過模塊化制備。

2.根據權利要求1所述的一種模塊化制備化學小分子探針的方法，其特征在于：

光親和標記基團的模塊庫制備：

(1)二異丙胺和重蒸的THF溶液,先后滴加正丁基鋰、乙酰乙酸乙酯，加入溴丙炔，通過萃取、減壓蒸餾得到化合物b1；

(2)加入化合物b2、乙二醇對甲苯磺酸和重蒸甲苯，減壓旋蒸去除大部分甲苯溶液，通過萃取、減壓蒸餾、柱層析分離得到目標化合物b3；

(3)加入重蒸四氫呋喃，四氫鋁鋰，將化合物b3溶于重蒸四氫呋喃中，緩慢滴入反應體系中，反應完成用鹽酸水溶液淬滅反應，通過濾除、萃取、減壓旋蒸、柱層析分離，得到目標化合物b4；

(4)加入對甲苯磺酸，將化合物b5溶于丙酮中，并注入反應體系中，反應完全用飽和的碳酸氫鈉水溶液淬滅反應，通過萃取、減壓旋蒸、柱層析分離，得到較純的目標化合物b5；

(5)加入化合物b5，充入氨氣，反應過程中將羥胺氧磺酸溶于無水甲醇中，滴入反應體系中，將反應中間體用二氯甲烷溶解，加入三乙胺，再將碘單質溶于二氯甲烷中，滴入，通過減壓旋蒸、柱層析分離，得到較純的目標化合物b6；

(6)將碘，咪唑和三苯基膦溶解二氯甲烷中，將化合物b6溶于二氯甲烷中，滴入，反應完全后通過萃取三次、減壓旋蒸、柱層析分離，得到較純的目標化合物b；

3.根據權利要求2所述的一種模塊化制備化學小分子探針的方法，其特征在于：所述光親和標記基團的模塊庫制備中，充入氬氣，在無水無氧條件下進行，并通過TLC監測反應完全；反應完全后通過無水硫酸鈉進行干燥，乙酸乙酯進行萃取，以200—300目硅膠為固定相進行柱層析分離。

4.根據權利要求1所述的一種模塊化制備化學小分子探針的方法，其特征在于：

連接基團的模塊庫制備：

(1)加入g1，g2和三乙胺溶于DMF溶液中，反應完全加入飽和碳酸氫鈉溶液淬滅，通過萃取、洗滌、干燥，減壓旋蒸、柱層析分離，得到較純的目標化合物g；

(2)加入g3和Pd/C溶于甲醇溶液中，充入氬氣制作無水無氧環境，用氫氣置換氬氣，反應完全，通過減壓旋蒸、柱層析分離，得到較純的目標化合物g4；

5.根據權利要求4所述的一種模塊化制備化學小分子探針的方法，其特征在于：所述連接基團的模塊庫制備中，通過TLC監測反應完全；反應完全后通過無水硫酸鈉進行干燥，通過二氯甲烷進行萃取，飽和食鹽水溶液洗滌，無水硫酸鈉進行干燥，以200—300目硅膠為固定相進行柱層析分離。

6.根據權利要求1所述的一種模塊化制備化學小分子探針的方法，其特征在于：

報告基團的模塊化制備：

(1)加入羅丹明-B，Boc-哌嗪，HOBT，EDCI和三乙胺溶于二氯甲烷溶液中，反應完全，加入二氯甲烷，通過洗滌，干燥，減壓旋蒸，柱層析分離，得到較純的目標化合物f1；

(2)加入化合物f1溶于二氯甲烷中，將三氟乙酸溶于二氯甲烷中，滴入，反應完全，加入飽和碳酸氫鈉水溶液淬滅反應，通過萃取、干燥、減壓旋蒸，得到化合物f2；

7.根據權利要求6所述的一種模塊化制備化學小分子探針的方法，其特征在于：所述報告基團的模塊化制備中，通過TLC監測反應完全；反應完全后通過無水硫酸鈉進行干燥，通過二氯甲烷進行萃取，飽和食鹽水溶液洗滌，無水硫酸鈉進行干燥，以200—300目硅膠為固定相進行柱層析分離。