[發(fā)明專利]一種檢測CYP2C19基因多態(tài)性的檢測位點、引物組合物及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811645770.6
• 申請日: 2018-12-30
• 公開（公告）號: CN111378739B
• 公開（公告）日: 2021-01-22
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 邵鳳;周素鳳;朱佑民;鄧文杰;孫健;王璐;楊平
• 申請（專利權(quán)）人: 南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院;蘇州泓迅生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12N15/11
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟

本發(fā)明提供了一種檢測CYP2C19基因多態(tài)性的檢測位點、引物組合物及其應(yīng)用，所述引物組合物包括針對CYP2C19*2的12662AG的特異性上下游引物、針對CYP2C19*3的87313AC的特異性上下游引物和針對CYP2C19*17的3402CT的特異性上下游引物；本發(fā)明通過選用特異位點并設(shè)計得到引物組合物，結(jié)合檢測體系中各組分濃度和反應(yīng)條件的相互配合，實現(xiàn)了簡潔高效，一步反應(yīng)，特異性好，靈敏度高的多態(tài)性檢測，具有廣闊的應(yīng)用前景和巨大的市場價值。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種檢測CYP2C19基因多態(tài)性的檢測位點、引物組合物及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

CYP2C19是一種重要的藥物代謝酶，其對藥物反應(yīng)起著關(guān)鍵性的作用。其基因多態(tài)性可影響到許多重要臨床應(yīng)用藥物的代謝。CYP2C19為常染色體隱性遺傳，至少存在14種突變基因和18種等位基因突變。CYP2C19亞型對藥物反應(yīng)起著關(guān)鍵性的作用，因其活性存在顯著的個體差異，表現(xiàn)為遺傳多態(tài)性，從而產(chǎn)生血藥濃度的個體差異。CYP2C19*2突變會引起高加索人和日本人群抗痙攣藥物的弱代謝。攜帶*2/*2基因型的患者對HIV蛋白酶抑制的代謝效率降低了50％。CYP2C19*3聯(lián)合CYP2C19*2可100％解釋該人群抗痙攣藥物的弱代謝。CYP2C19*2和CYP2C19*3為CYP2C19基因的主要突變體，其等位基因占東方人弱代謝表型的99％以上。CYP2C19*17型導(dǎo)致CYP2C19基因編碼的酶活性增加，加速藥物在體內(nèi)代謝，治療效果降低。在乳癌臨床試驗中，攜帶CYP2C19*17突變的患者可能受益于它莫西芬的輔佐治療。目前已知的CYP2C19參與代謝的主要藥物有奧美拉唑、埃索美拉唑、蘭索拉唑、泮托拉唑、瑞舒伐他汀、伏立康唑、華法林、S-美芬妥英、氯吡格雷等。因此，CYP2C19基因型的檢測，可以指導(dǎo)臨床設(shè)計個體化用藥方案，合理用藥，充分發(fā)揮藥物對機體的作用，為臨床安全、有效用藥以及減少藥物毒副反應(yīng)提供重要依據(jù)。

目前，常用的基因分型方法主要有：1)基于凝膠電泳技術(shù)，如：PCR反應(yīng)結(jié)合限制性酶切片段長度多態(tài)性分析(PCR-RFLP)法、等位基因特異性擴增法等；2)基于熒光標記雜交反應(yīng)的基因分型技術(shù)，如：寡核苷酸連接分析、焦磷酸法DNA測序、直接雜合子測序、等位基因特異性引物延伸等方法。前述兩種技術(shù)都是在PCR擴增反應(yīng)之后，再采取不同的方法檢測多態(tài)性位點，這些方法操作繁瑣，檢測周期長，檢測結(jié)果不易準確，不能滿足臨床快速、高效、靈敏檢測的要求。3)基因芯片技術(shù)，基因芯片技術(shù)可將數(shù)以萬計、乃至百萬計的特定序列的DNA片段(基因探針)，有規(guī)律地排列固定于硅片、玻片等支持物上，構(gòu)成的一個二維DNA探針陣列，利用這類芯片與標記的生物樣品進行雜交，可對樣品的基因表達譜生物信息進行快速定性和定量分析。基因芯片技術(shù)由于高通量等優(yōu)點在基因多態(tài)性檢測中得到大量應(yīng)用，一次實驗即可高通量檢測所有待測樣本基因的信息，簡單、快速，但存在檢測時條件難以控制、重復(fù)性差，準確性低，檢測成本高昂，易出現(xiàn)假陽性、假陰性結(jié)果、靈敏度較低等缺點；且現(xiàn)有技術(shù)中大多僅能同時檢測CYP2C19相關(guān)基因中的1個或2個基因型，能夠同時實現(xiàn)多個基因型的檢測的研究較少。

因此，開發(fā)一種特異性好、靈敏度高、費用低廉、可同時檢測多個CYP2C19相關(guān)基因(CYP2C19*2、CYP2C19*3、CYP2C19*17)多態(tài)性的方法/技術(shù)，為臨床確定最佳治療劑量、制定合理用藥方案、發(fā)揮最大療效、避免和減少不良反應(yīng)提供指導(dǎo)依據(jù)，具有廣闊的應(yīng)用前景和巨大的市場價值。

發(fā)明內(nèi)容

針對現(xiàn)有技術(shù)的不足及實際的需求，本發(fā)明提供一種檢測CYP2C19基因多態(tài)性的檢測位點、引物組合物及其應(yīng)用，選用特異檢測位點并設(shè)計得到引物組合物，結(jié)合檢測體系中各組分濃度和反應(yīng)條件的相互配合，實現(xiàn)了簡潔高效、一步反應(yīng)、特異性好、靈敏度高的多態(tài)性檢測，具有廣闊的應(yīng)用前景和巨大的市場價值。

為達此目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：