[發明專利]一種檢測CYP2C19基因多態性的檢測位點、引物組合物及其應用

有效

• 申請號: 201811645770.6
• 申請日: 2018-12-30
• 公開（公告）號: CN111378739B
• 公開（公告）日: 2021-01-22
• 發明（設計）人: 邵鳳;周素鳳;朱佑民;鄧文杰;孫健;王璐;楊平
• 申請（專利權）人: 南京醫科大學第一附屬醫院;蘇州泓迅生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12N15/11
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟

1.一種檢測CYP2C19基因多態性的引物組合物，其特征在于，所述引物組合物為針對CYP2C19*2的12662 AG的特異性上下游引物、針對CYP2C19*3的87313 AC的特異性上下游引物和針對CYP2C19*17的3402 CT的特異性上下游引物的組合；

其中，所述針對CYP2C19*2的12662 AG的特異性上下游引物的核苷酸序列如SEQ IDNO.1-2所示，所述針對CYP2C19*3的87313 AC的特異性上下游引物的核苷酸序列如SEQ IDNO.3-4所示，所述針對CYP2C19*17的3402 CT的特異性上下游引物的核苷酸序列如SEQ IDNO.5-6所示。

2.一種如權利要求1所述的引物組合物用于制備藥物和/或試劑盒的應用。

3.一種基因多態性檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括權利要求1所述的引物組合物。

4.根據權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括添加了Mg²⁺的PCR緩沖液、模板、dNTPs、Taq酶和去離子水。

5.根據權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括陽性對照和陰性對照；

其中，所述陰性對照為去離子水，所述陽性對照為同時含有CYP2C19*2、CYP2C19*3和CYP2C19*17多態性的突變體Mutant質粒和野生型Wild type質粒；

其中，所述野生型Wild type的序列如SEQ ID NO.7所示，所述同時含有CYP2C19*2、CYP2C19*3和CYP2C19*17多態性的突變體Mutant的序列為SEQ ID NO.8。

6.一種檢測體系，其特征在于，所述檢測體系包括權利要求1所述的引物組合物。

7.根據權利要求6所述的檢測體系，其特征在于，所述檢測體系還包括添加了Mg²⁺的PCR緩沖液、模板、dNTPs、Taq酶和去離子水；

所述dNTPs的濃度為0.8-1.2 mM；

所述引物組合物的每條引物的濃度為0.8-1.2pmol/μL；

所述Taq酶的濃度為0.1-0.3 U/μL；

所述模板的濃度為1.4-1.8ng/μL。

8.根據權利要求7所述的檢測體系，其特征在于，所述檢測體系還包括陽性對照和陰性對照；

其中，所述陰性對照為去離子水，所述陽性對照為同時含有CYP2C19*2、CYP2C19*3和CYP2C19*17多態性的突變體Mutant質粒和野生型Wild type質粒；

其中，所述野生型Wild type的序列如SEQ ID NO.7所示，所述同時含有CYP2C19*2、CYP2C19*3和CYP2C19*17多態性的突變體Mutant的序列為SEQ ID NO.8。

9.根據權利要求6-8中任一項所述的檢測體系，其特征在于，所述檢測體系的檢測方法包括多重PCR法。

10.一種檢測CYP2C19基因多態性的非診斷目的的方法，其特征在于，所述方法采用權利要求1所述的引物組合物、權利要求3-5中任一項所述的試劑盒或權利要求6-9中任一項所述的檢測體系。

11.根據權利要求10所述的方法，其特征在于，所述方法的PCR條件為：96℃ 2min 預變性；96℃ 15s，58℃ 15s，72℃ 40s，30個循環；72℃ 5min，1個循環；4℃保藏。