[發(fā)明專利]一種基于血尿中代謝產(chǎn)物預(yù)測甘地膠囊治療糖尿病腎病機(jī)制的新方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811645150.2
• 申請日: 2018-12-29
• 公開（公告）號: CN109507337B
• 公開（公告）日: 2022-02-22
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張健;徐阿晶;陳嘯飛;張其鏘;徐人杰;王宏宇;劉艷;祁佳;劉悅
• 申請（專利權(quán)）人: 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬新華醫(yī)院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N33/68;G01N33/70
• 代理公司: 上海精晟知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31253
• 代理人: 杜蔚瓊

本發(fā)明提供了一種基于血尿中代謝產(chǎn)物預(yù)測甘地膠囊治療糖尿病腎病機(jī)制的方法，其特征在于,具體步驟如下所示:S1、1:1的選取試驗(yàn)組和對照組；S2、定期收集待測樣本；S3、處理S2所述的樣本，進(jìn)行UPLC?Q?TOF/MS分離分析；S4、對S3獲得的UPLC?Q?TOF/MS圖譜數(shù)據(jù)進(jìn)行代謝輪廓分析，獲得數(shù)據(jù)集；S5、根據(jù)S4獲得的數(shù)據(jù)集構(gòu)建PLS?DA模型；S6、根據(jù)S5構(gòu)件的模型的S?PLOT載荷圖和VIP分值，篩選出能夠區(qū)分空白組和甘地膠囊給藥組的代謝標(biāo)志物；S7、采用IPA分析方法對S6篩選得到的代謝標(biāo)志物進(jìn)行富集分析，將各代謝標(biāo)志物根據(jù)富集效率進(jìn)行排序。通過該方法能夠預(yù)測甘地膠囊治療糖尿病腎病的藥理機(jī)制。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及代謝組學(xué)領(lǐng)域，特別涉及一種基于血/尿中代謝產(chǎn)物預(yù)測甘地膠囊治療糖尿病腎病機(jī)制的方法。

背景技術(shù)

代謝組學(xué)是系統(tǒng)生物學(xué)研究領(lǐng)域的一個重要分支，其通過對病理生理因素或基因修飾造成的生物化學(xué)變化及代謝輪廓分析，為復(fù)雜機(jī)制的闡釋提供海量信息，這與中藥復(fù)方制劑成分多、藥理機(jī)制繁雜的特點(diǎn)不謀而合，因此可用于中藥復(fù)方制劑藥理學(xué)研究。目前，代謝組學(xué)研究方法已廣泛應(yīng)用于各類代謝性疾病的病理機(jī)制和藥物作用機(jī)制的研究。核磁共振(NMR)、氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用(GC-MS)和液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS)技術(shù)是三種常用于代謝組學(xué)分析的現(xiàn)代分析技術(shù)。

糖尿病腎病患者微血管病變的發(fā)生率較高，血壓是腎功能損害的獨(dú)立危險因素，若高血壓患者同時患有糖尿病，其糖尿病腎病發(fā)生率將顯著提高，臨床表現(xiàn)為持續(xù)性蛋白尿，患者將進(jìn)入腎衰竭階段，死亡率會顯著增加。目前，市場上針對糖尿病腎病治療的中西藥非常少。院內(nèi)制劑甘地膠囊經(jīng)過多年的臨床驗(yàn)證，具有顯著降低蛋白尿的作用，在院內(nèi)長期用于糖尿病腎病等微血管病變的治療。前期臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，甘地膠囊可以顯著減少糖尿病腎病患者的24h尿微量白蛋白排泄，延緩糖尿病腎病的進(jìn)展，保護(hù)和改善腎臟功能，從而提高患者的生命質(zhì)量，且患者在服用甘地膠囊2個療程(4個月)后有明顯改善。然而，甘地膠囊治療糖尿病腎病的分子機(jī)制仍然不甚清楚。故而，一種能夠明確該藥物作用機(jī)制的方法急待研究。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明旨在克服上述缺陷，提供一種能夠明確甘地膠囊治療糖尿病腎病患者的機(jī)制。

本發(fā)明提供的一種基于血/尿中代謝產(chǎn)物預(yù)測甘地膠囊治療糖尿病腎病機(jī)制的方法，其特征在于,具體步驟如下所示:

S1、1:1的選取試驗(yàn)組和對照組；

該試驗(yàn)組指服用甘地膠囊的病患；

該對照組指未服用甘地膠囊的病患。

S2、定期收集待測樣本；

兩組的病患均采用同樣的檢測周期進(jìn)行樣本的收集。

S3、處理S2上述的樣本，進(jìn)行UPLC-Q-TOF/MS分離分析；

S4、對S3獲得的UPLC-Q-TOF/MS圖譜數(shù)據(jù)進(jìn)行代謝輪廓分析，獲得數(shù)據(jù)集；

該代謝輪廓分析指在特定代謝過程中對結(jié)構(gòu)相似或性質(zhì)相關(guān)的預(yù)設(shè)代謝物采用針對性的分析技術(shù)進(jìn)行定量測定，如：某一類結(jié)構(gòu)相似、性質(zhì)相關(guān)的化合物等。

S5、根據(jù)S4獲得的數(shù)據(jù)集構(gòu)建OPLS-DA模型(采用使用分析軟件SIMCA-P11.0(Umetrics AB,Umea,Sweden)等方式)構(gòu)建偏最小二乘法判別分析(OPLS-DA)模型；

S6、根據(jù)S5構(gòu)建的模型中S-PLOT載荷圖和計算VIP分值，同時獲得相應(yīng)的P值，以VIP值大于1.0且P值小于0.05為條件，篩選出能夠區(qū)分空白組和甘地膠囊給藥組的代謝標(biāo)志物。該步驟可采用分析軟件SIMCA-P11.0(Umetrics AB,Umea,Sweden)來實(shí)現(xiàn)。

S7、采用IPA分析方法對S6篩選得到的代謝標(biāo)志物進(jìn)行富集分析，將各代謝標(biāo)志物根據(jù)富集效率進(jìn)行排序。