[發明專利]一種基于血尿中代謝產物預測甘地膠囊治療糖尿病腎病機制的新方法

有效

• 申請號: 201811645150.2
• 申請日: 2018-12-29
• 公開（公告）號: CN109507337B
• 公開（公告）日: 2022-02-22
• 發明（設計）人: 張健;徐阿晶;陳嘯飛;張其鏘;徐人杰;王宏宇;劉艷;祁佳;劉悅
• 申請（專利權）人: 上海交通大學醫學院附屬新華醫院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N33/68;G01N33/70
• 代理公司: 上海精晟知識產權代理有限公司 31253
• 代理人: 杜蔚瓊

1.一種基于血/尿中代謝產物預測甘地膠囊治療糖尿病腎病機制的方法，其特征在于,具體步驟如下所 示:

S1、1:1的選取試驗組和對照組；

S2、定期收集待測樣本；

S3、處理S2所述的樣本，進行UPLC-Q-TOF/MS分離分析；

S4、對S3獲得的UPLC-Q-TOF/MS圖譜數據進行代謝輪廓分析，獲得數據集；

S5、根據S4獲得的數據集構建OPLS-DA模型；

所述OPLS-DA模型的多元統計性能參數為R²X = 0.599，R²Y = 0.921，Q² = 0.745；

S6、根據S5構件的模型的S-PLOT載荷圖和VIP分值，同時獲得相應的P值，以VIP值大于1.0且P值小于0.05為條件，篩選出能夠區分空白組和甘地膠囊給藥組的代謝標志物；

S7、采用IPA分析方法對S6篩選得到的代謝標志物進行富集分析，將各代謝標志物根據富集效率進行排序;

所述代謝產物主要為脂質類代謝物和氨基酸類代謝物；

所述UPLC-Q-TOF/MS分離分析的參數如下所示：

色譜的流動相的組成為：B：0.1 %甲酸乙腈，梯度洗脫設置如下：0-2 min: 3%B，2-11min: 3%-15%B, 11-16 min: 15%-30%B，16-18 min: 30%-95%B,18-19.5 min: 95%B,19.5-20 min:95%-3%；之后平衡4 min；流速400μL /min，進樣量4μL；

飛行質譜采用ESI源，參數設置為正離子模式；

毛細管電壓：3500 V；干燥氣體流速：11 L/min；噴霧氣壓：45 psig；干燥氣溫度：350℃；碎裂電壓：120 V；質量范圍：m/z 50-1000；MS/MS二級質譜分析時碰撞能量設定為10-30eV。

2.如權利要求1所述的一種基于血/尿中代謝產物預測甘地膠囊治療糖尿病腎病機制的方法，其特征在于：

所述代謝輪廓分析指采用峰過濾技術，只保留相同的保留時間內豐度最強的若干離子片段，刪除其它片段。

3.如權利要求1所述的一種基于血/尿中代謝產物預測甘地膠囊治療糖尿病腎病機制的方法，其特征在于：

所述代謝輪廓分析的步驟如下所示：

S4-1.對數據進行非線性校正和歸一化，保留那些在QC樣品中RSD小于X%的變量；

S4-2.將每個樣品的LC-MS數據被標準化為每個樣品的所有峰面積之和，獲得一個新的數據集。

4.如權利要求1所述的一種基于血/尿中代謝產物預測甘地膠囊治療糖尿病腎病機制的方法，其特征在于：

處理S2樣本的方法為：將甲醇和乙腈的混合液添加到樣本中，混合均勻后離心分離，取出上清液待測。

5.如權利要求4所述的一種基于血/尿中代謝產物預測甘地膠囊治療糖尿病腎病機制的方法，其特征在于：

所述甲醇和乙腈的混合液與樣本的體積比為4-8：1。

6.如權利要求1所述的一種基于血/尿中代謝產物預測甘地膠囊治療糖尿病腎病機制的方法，其特征在于：

運用Student's T-test統計分析方法，判斷差異代謝物是否具有統計學意義。