[發明專利]一種馬蹄蓮芽眼組織培養方法

在審

• 申請號: 201811639320.6
• 申請日: 2018-12-29
• 公開（公告）號: CN109526751A
• 公開（公告）日: 2019-03-29
• 發明（設計）人: 吳高殷;王曉;鄒薇薇;魏春芳
• 申請（專利權）人: 貴州大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 貴陽中新專利商標事務所 52100
• 代理人: 胡緒東

本發明公開了一種馬蹄蓮芽眼組織培養方法，該方法為：通過消毒清洗、外植體愈傷組織誘導、外植體的增殖分化誘導、分化苗的生根誘導獲得馬蹄蓮，本發明在消毒過程中經過篩選得出75%乙醇30s，0.1%升汞5min和2%NaClO 6min為外植體適宜的消毒方法；外植體在誘導愈傷組織進行全面試驗時篩選出適宜的激素組合為MS+6?BA（2.0mg/L）+NAA(0.5mg/L)；愈傷組織在MS+6?BA（2.0mg/L）+NAA(0.2mg/L)時分化數達21.33為適宜分化培養基；而1/2MS+NAA(0.5~1.0mg/L)為適宜試管苗生根培養基，生根率達100%，本發明的培養方法速度慢、周期短、培育成本低和價格低。

技術領域

本發明涉及一種馬蹄蓮芽眼組織培養方法，屬于馬蹄蓮塊莖組織技術領域。

背景技術

馬蹄蓮(Zantedeschia aethiopica(L.)Spreng.)，馬蹄蓮屬多年生粗壯草本，具塊莖，塊莖內含大量草本鈣結晶和生物堿，有毒。馬蹄蓮花色品種多，如橘紅、玫紅、紫紅、鮮黃等顏色，花色艷麗、觀賞性強等優點，既可作為切花，又可作為盆花市場需求量較大。有逐漸取代“球根花卉之王”百合的趨勢。而馬蹄蓮常規繁殖方式為種球繁殖，速度慢，周期長，培育成本大，價格高。

發明內容

本發明要解決的技術問題是：提供一種馬蹄蓮芽眼組織培養方法，以解決上述現有技術中存在的問題。

本發明采取的技術方案為：一種馬蹄蓮芽眼組織培養方法，該方法包括以下步驟：

(1)將大棚內的馬蹄蓮轉移至室內培養15d，戴上手套從基質中取出洗凈泥炭土，然后用刀片切下芽眼；加入4滴洗潔精在自來水下沖洗30min；轉移至超凈工作臺上進行消毒；

(2)外植體愈傷組織誘導：消毒后的芽眼，用無菌刀片切掉芽眼基部周圍與消毒液接觸的部分組織塊；接種至愈傷組織誘導培養基中，以MS為基本培養基，培養基中添加6-BA+NAA+瓊脂+蔗糖，對芽眼愈傷愈傷組織進行誘導，培養條件：暗培養，25±2℃；

(3)外植體的增殖分化誘導：芽眼愈傷組織在原培養基中進行繼代培養1-2次，使愈傷量增加，然后轉接至分化培養基中進行培養，分化培養基添加6-BA和NAA，培養條件：光照強度2000lux，16h/d，溫度為25±2℃；

(4)分化苗的生根誘導：將白色、乳白色愈傷組織或者有芽點的愈傷組織轉接至原培養基中繼代1-2次，使其愈傷增殖，然后轉至分化培養基中進行分化，以MS為基本培養基，培養基中添加6-BA與NAA，培養條件：光照強度2000lux，16h/d，溫度為25±2℃。

優選的，上述步驟(1)中消毒方法為：75％乙醇30s，0.1％升汞5min和2％NaClO6min。

優選的，上述步驟(2)中6-BA、NAA、瓊脂和蔗糖的量分別為2mg/L、0.5mg/L、6g/L和30g/L。

優選的，上述步驟(3)中6-BA和NAA的量分別為2mg/L和0.2mg/L。

優選的，上述步驟(4)中NAA的量為0.5-1mg/L。

本發明的有益效果：與現有技術相比，本發明在消毒過程中經過篩選得出75％乙醇30s，0.1％升汞5min和2％NaClO 6min為外植體適宜的消毒方法；外植體在誘導愈傷組織進行全面試驗時篩選出適宜的激素組合為MS+6-BA(2.0mg/L)+NAA(0.5mg/L)；愈傷組織在MS+6-BA(2.0mg/L)+NAA(0.2mg/L)時分化數達21.33為適宜分化培養基；而1/2MS+NAA(0.5～1.0mg/L)為適宜試管苗生根培養基，生根率達100％，本發明的培養方法速度慢、周期短、培育成本低和價格低。

附圖說明

圖1為不同消毒方法對外植體的影響；