[發(fā)明專利]一種GGT抗體免疫納米磁珠及其制備方法和應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811638072.3
• 申請日: 2018-12-29
• 公開（公告）號: CN109613231A
• 公開（公告）日: 2019-04-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉英超;梅勝蘭;許尚臣;蘭川金
• 申請（專利權(quán)）人: 山東省立醫(yī)院
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53;G01N33/531
• 代理公司: 山東濟(jì)南齊魯科技專利事務(wù)所有限公司 37108
• 代理人: 張娟

本發(fā)明公開了一種GGT抗體免疫納米磁珠及其制備方法和用途，GGT抗體免疫納米磁珠為核殼型結(jié)構(gòu)，內(nèi)核為磁性材料Fe₃O₄，中間層為高聚物脂質(zhì)體，最外層為GGT抗體；所述高聚物脂質(zhì)體為羧甲基殼聚糖十六烷基季銨鹽和膽固醇的混合物；本申請將GGT抗體接在Fe₃O₄納米磁珠上，通過綠色熒光GGT抗體結(jié)合在膠質(zhì)瘤表面富集血液中的膠質(zhì)瘤細(xì)胞，后續(xù)的檢測流程同EpCAM試劑盒檢測，通過膠質(zhì)瘤細(xì)胞包面特意表達(dá)GGT蛋白表達(dá)來確定膠質(zhì)瘤細(xì)胞，在臨床上合理并且實用，通過CTC分析可以通過動態(tài)檢測腫瘤細(xì)胞的變化，實時動態(tài)的反映患者的治療狀況及疾病進(jìn)程，為目前的腫瘤治療監(jiān)測提供無創(chuàng)精準(zhǔn)的補(bǔ)充。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及免疫納米磁珠技術(shù)領(lǐng)域，具體說是一種GGT抗體免疫納米磁珠及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

腦膠質(zhì)瘤是人體十大惡性腫瘤之一，也是最常見的中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤，其中多行性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤GBM最常見，并且具有侵襲性強(qiáng)、致死率高、易復(fù)發(fā)等特點(diǎn)，目前臨床上常見的問題是部分病人放化療完成后出現(xiàn)的放化療反應(yīng)的假性進(jìn)展和膠質(zhì)瘤的真性復(fù)發(fā)難以鑒別，早期發(fā)現(xiàn)和診斷復(fù)發(fā)病灶及早再次手術(shù)或延長化療周期是提高GBM病人生存期的關(guān)鍵技術(shù)，更是精準(zhǔn)醫(yī)療的重大需求。

循環(huán)腫瘤細(xì)胞CTCs是指自發(fā)或因診療操作由實體瘤或轉(zhuǎn)移灶釋放進(jìn)入外周血循環(huán)的腫瘤細(xì)胞，是惡性腫瘤患者出現(xiàn)術(shù)后復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的重要原因，也是導(dǎo)致腫瘤患者死亡的重要因素。CTCs檢測被稱為液體活檢，雖然具有可重復(fù)檢測、無創(chuàng)傷等優(yōu)點(diǎn)，但是相當(dāng)具有挑戰(zhàn)性，價格昂貴，痛苦，存在潛在危險，外周血液中的循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測作為一種可靠無創(chuàng)的方式，具有良好的前景，但是目前由美國FDA批準(zhǔn)臨床使用的商業(yè)化的CTC技術(shù)(Cell Search,Janssen Diagnostics)主要基于對EpCAM的檢測。但是這些檢測技術(shù)對于不表達(dá)表面標(biāo)記物EpCAM的腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞是無效的，并且由于上皮間質(zhì)化過程也會導(dǎo)致細(xì)胞表面標(biāo)記物的蛋白表達(dá)變化，從而影響其準(zhǔn)確性。

另一方面，CTC在人體中的含量極其稀有，每千億個血細(xì)胞中只有1～10個CTC，這為CTC的檢測分析帶來了巨大的挑戰(zhàn)，從膠質(zhì)瘤病人1ml血細(xì)胞中分辨出個位數(shù)的CTC其難度極大，因此CTC分析需要高靈敏度富集技術(shù)，最近的進(jìn)展表明膜結(jié)合蛋白酶G-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(GGT)可作為可激活熒光探針的靶標(biāo)。這種蛋白在膠質(zhì)瘤細(xì)胞過度表達(dá)，而且和膠質(zhì)瘤惡性程度呈正相關(guān)，但在正常腦組織中表達(dá)很低。因此，臨床上亟需設(shè)計一種不依賴于上皮細(xì)胞癌細(xì)胞表面標(biāo)記物的快速檢測系統(tǒng)，滿足臨床對GBM CTC無創(chuàng)液體活檢診斷和復(fù)發(fā)監(jiān)測的需要。

發(fā)明內(nèi)容

為解決上述問題，本發(fā)明的目的是提供一種GGT抗體免疫納米磁珠及其制備方法和應(yīng)用。

本發(fā)明為實現(xiàn)上述目的，通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)：

一種GGT抗體免疫納米磁珠，所述GGT抗體免疫納米磁珠為核殼型結(jié)構(gòu)，內(nèi)核為磁性材料Fe₃O₄，中間層為高聚物脂質(zhì)體，最外層為GGT抗體；所述高聚物脂質(zhì)體為羧甲基殼聚糖十六烷基季銨鹽和膽固醇的混合物。

優(yōu)選的，羧甲基殼聚糖十六烷基季銨鹽和膽固醇、磁性材料Fe₃O₄和GGT抗體的質(zhì)量比為15～20：12～16：36～48：1。

優(yōu)選的，GGT抗體免疫納米磁珠的平均粒徑為100～200nm。

優(yōu)選的，羧甲基殼聚糖十六烷基季銨鹽、膽固醇、磁性材料Fe₃O₄和GGT抗體的質(zhì)量比為20：15：42：1。

本發(fā)明還包括一種GGT抗體免疫納米磁珠的制備方法，包括以下步驟：

①將羧甲基殼聚糖十六烷基季銨鹽(HQCMC)、1,2-二油酰基磷脂酰膽堿(DOPC)和膽固醇分別溶于二氯甲烷中，備用；