[發明專利]一種GGT抗體免疫納米磁珠及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 201811638072.3
• 申請日: 2018-12-29
• 公開（公告）號: CN109613231A
• 公開（公告）日: 2019-04-12
• 發明（設計）人: 劉英超;梅勝蘭;許尚臣;蘭川金
• 申請（專利權）人: 山東省立醫院
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53;G01N33/531
• 代理公司: 山東濟南齊魯科技專利事務所有限公司 37108
• 代理人: 張娟

1.一種GGT抗體免疫納米磁珠，其特征在于：所述GGT抗體免疫納米磁珠為核殼型結構，內核為磁性材料Fe₃O₄，中間層為高聚物脂質體，最外層為GGT抗體；所述高聚物脂質體為羧甲基殼聚糖十六烷基季銨鹽和膽固醇的混合物。

2.根據權利要求1所述的一種GGT抗體免疫納米磁珠，其特征在于：羧甲基殼聚糖十六烷基季銨鹽和膽固醇、磁性材料Fe₃O₄和GGT抗體的質量比為15~20：12~16：36~48：1。

3.根據權利要求2所述的一種GGT抗體免疫納米磁珠，其特征在于：羧甲基殼聚糖十六烷基季銨鹽、膽固醇、磁性材料Fe₃O₄和GGT抗體的質量比為20：15：42：1。

4.一種GGT抗體免疫納米磁珠的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：

①將羧甲基殼聚糖十六烷基季銨鹽、1,2-二油酰基磷脂酰膽堿和膽固醇分別溶于二氯甲烷中，備用；

②將N-N-羥基琥珀酰亞胺、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽分別溶于雙蒸水中搖勻，備用；

③分別吸取步驟①中配制的羧甲基殼聚糖十六烷基季銨鹽、1,2-二油酰基磷脂酰膽堿和膽固醇的二氯甲烷溶液，加入燒瓶中，置于2~6℃的環境中備用；

將油溶性Fe₃O₄磁珠加入至燒瓶中，然后向燒瓶中加入pH7.2~7.4磷酸鹽緩沖溶液，搖晃均勻，然后將燒瓶置于超聲波細胞粉碎機中超聲后，除去二氯甲烷，然后向燒瓶中加入步驟②配制的N-N-羥基琥珀酰亞胺雙蒸水和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽雙蒸水，混勻，然后向燒瓶中加入GGT抗體，在2~6℃下反應10~15小時，得到GGT抗體免疫納米磁珠。

5.根據權利要求4所述的一種GGT抗體免疫納米磁珠的制備方法，其特征在于：步驟①中羧甲基殼聚糖十六烷基季銨鹽、1,2-二油酰基磷脂酰膽堿和膽固醇與二氯甲烷的質量體積比均為3~5mg：1mL。

6.根據權利要求4所述的一種GGT抗體免疫納米磁珠的制備方法，其特征在于：步驟②中N-N-羥基琥珀酰亞胺、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽與雙蒸水的質量體積比為1~3mg：1mL。

7.根據權利要求4所述的一種GGT抗體免疫納米磁珠的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：

①將羧甲基殼聚糖十六烷基季銨鹽、1,2-二油酰基磷脂酰膽堿和膽固醇分別溶于二氯甲烷中，備用；其中羧甲基殼聚糖十六烷基季銨鹽、1,2-二油酰基磷脂酰膽堿和膽固醇與二氯甲烷的質量體積比均為3~5mg：1mL；

②將N-N-羥基琥珀酰亞胺、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽分別溶于雙蒸水中搖勻，備用；其中N-N-羥基琥珀酰亞胺、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽與雙蒸水的質量體積比為1~3mg：1mL；

③分別吸取步驟①中配制的羧甲基殼聚糖十六烷基季銨鹽、1,2-二油酰基磷脂酰膽堿和膽固醇的二氯甲烷溶液，加入燒瓶中，置于2~6℃的環境中備用；

將油溶性Fe₃O₄磁珠加入至燒瓶中，然后向燒瓶中加入pH7.2~7.4磷酸鹽緩沖溶液，搖晃均勻，然后將燒瓶置于超聲波細胞粉碎機中超聲后，除去二氯甲烷，然后向燒瓶中加入步驟②配制的N-N-羥基琥珀酰亞胺雙蒸水溶液和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽雙蒸水溶液，混勻，然后向燒瓶中加入GGT抗體，得到混合液，將混合液在2~6℃下反應10~15小時，得到GGT抗體免疫納米磁珠；

混合液中羧甲基殼聚糖十六烷基季銨鹽、1,2-二油酰基磷脂酰膽堿、膽固醇、油溶性Fe₃O₄磁珠、N-N-羥基琥珀酰亞胺、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽和GGT抗體的質量比為15~20：12~16：12~16：36~48：140~200：240~320：1。

8.一種GGT抗體免疫納米磁珠的應用，其特征在于：快速富集膠質細胞瘤循環腫瘤細胞。