[發(fā)明專利]人中性粒細胞明膠酶相關脂質(zhì)運載蛋白定量檢測卡及其臨床應用

有效

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• 申請日: 2018-12-29
• 公開（公告）號: CN109709340B
• 公開（公告）日: 2022-02-11
• 發(fā)明（設計）人: 馬永;丁娜
• 申請（專利權）人: 江蘇眾紅生物工程創(chuàng)藥研究院有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明涉及人中性粒細胞明膠酶相關脂質(zhì)運載蛋白定量檢測卡及其臨床應用。本發(fā)明制備了多種抗體，并進行配對篩選，獲得靈敏度及特異性均能滿足定量檢測卡需求的一組抗體組合(NG02及NG19)；同時其方便大量生產(chǎn)，可滿足日后大規(guī)模臨床應用的需求。對上述抗體組合進行檢測體系的調(diào)試優(yōu)化工作，獲得操作簡便，靈敏度，特異性及相關檢測性能可滿足人血液或尿液樣本檢測的人中性粒細胞明膠酶相關脂質(zhì)運載蛋白的膠體金免疫層析定量檢測卡。

技術領域

本發(fā)明屬于生物技術領域，具體的涉及兩種抗人中性粒細胞明膠酶相關脂質(zhì)運載蛋白抗體及其制備方法以及上述抗體在人中性粒細胞明膠酶相關脂質(zhì)運載蛋白定量檢測中的應用。

背景技術

中性粒細胞明膠酶相關脂質(zhì)運載蛋白(neutrophil gelatinase-associatedlipocalin,NGAL)，又稱載脂蛋白-2(Lipocalin-2)，屬于lipocalin超家族的成員，是一種相對分子質(zhì)量為25kDa的分泌型糖蛋白。在一系列臨床研究中，已證明NGAL對于急性腎損傷具有診斷和評估預后的價值。目前，NGAL是診斷急性腎損傷的重要標志物。發(fā)生急性腎損傷時血、尿NGAL的水平均升高。因此，尿和血中NGAL檢測可作為診斷急性腎損傷的早期、敏感且極具特異性的生物學標志物。

NGAL的檢測最初采用免疫印跡法(Western Blot)，但由于該方法靈敏度和精密度低、操作復雜、重復性差等缺點現(xiàn)在已很少用于NGAL的定量研究。2005年丹麥BioPorto公司首先推出酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)商品試劑盒，可用于血清(漿)、尿液的NGAL檢測，標本量需100μL，檢測周期約4h，檢測限達到0.1ng/mL。隨后，有適用于全自動免疫分析儀的分析系統(tǒng)面世，如美國雅培公司的Architect i2000SR全自動免疫分析儀測定尿液NGAL(化學發(fā)光微粒子免疫分析法)，標本量需150μL，檢測周期約28h。化學發(fā)光法靈敏度雖高，但測定線性范圍較小且檢測成本較高，需要特定儀器，難以在臨床上普及應用；美國博適公司的Triage分析儀檢測EDTA抗凝血漿或全血(雙抗體夾心免疫熒光層析法)，15h即可完成NGAL的測定，檢測范圍50～2000ng/mL。這些檢測系統(tǒng)只能單一的檢測尿液或者血漿，且標本用量大，檢測周期長，檢測范圍窄，限制了其在臨床的常規(guī)應用。

本試劑盒采用膠體金法，該法快速、簡便，易操作，自動化程度高，且與ELISA法、免疫比濁法等均具有很好的相關性，臨床應用非常廣泛，與其他方法檢測試劑比較，通用性較強。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術問題是提供一組能有效的、特異性結(jié)合人NGAL的抗體對。

本發(fā)明的第一目的在于提供兩種抗人中性粒細胞明膠酶相關脂質(zhì)運載蛋白抗體。

第一種抗人中性粒細胞明膠酶相關脂質(zhì)運載蛋白抗體(NG02)，

其重鏈可變區(qū)含有以下的互補決定區(qū)：氨基酸序列如序列SEQ ID NO：1所示的HCDR1、如序列SEQ ID NO：2所示的HCDR2和/或如序列SEQ ID NO：3所示的HCDR3；

以及其輕鏈可變區(qū)序列含有以下的互補決定區(qū)：氨基酸序列如序列SEQ ID NO：4所示的LCDR1、如序列SEQ ID NO：5所示的LCDR2和/或如序列SEQ ID NO：6所示的LCDR3。

優(yōu)選的是本發(fā)明中NG02抗體重鏈可變區(qū)的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示，輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示。

第二種抗人中性粒細胞明膠酶相關脂質(zhì)運載蛋白抗體(NG19)，

其重鏈可變區(qū)含有以下的互補決定區(qū)：氨基酸序列如序列SEQ ID NO：9所示的HCDR1、如序列SEQ ID NO：10所示的HCDR2和/或如序列SEQ ID NO：11所示的HCDR3；