[發(fā)明專利]一種檢測(cè)BCR-ABL融合基因ABL激酶區(qū)突變的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811636832.7
• 申請(qǐng)日: 2018-12-29
• 公開（公告）號(hào): CN109777864A
• 公開（公告）日: 2019-05-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 尤雋丹;郝瑋;李小青
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 武漢康圣達(dá)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/6858
• 分類號(hào): C12Q1/6858;C12N15/11;C12Q1/6886
• 代理公司: 北京路浩知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君;陳征

1.一種檢測(cè)BCR-ABL融合基因ABL激酶區(qū)突變的方法，其特征在于，從外周血或骨髓樣本中提取RNA，隨機(jī)引物逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，再以cDNA為模板，在同一反應(yīng)體系中擴(kuò)增待測(cè)樣品中BCR-ABL融合基因兩種剪切型M-bcr和m-bcr，以擴(kuò)增產(chǎn)物為模板，COLD-PCR擴(kuò)增ABL激酶區(qū)，構(gòu)建文庫(kù)，文庫(kù)混合制備模板后上機(jī)測(cè)序。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述在同一反應(yīng)體系中擴(kuò)增待測(cè)樣品中BCR-ABL融合基因兩種剪切型M-bcr和m-bcr的方法為：以cDNA為模板，以SEQ ID NO.1-3所示序列為引物，進(jìn)行PCR擴(kuò)增。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，SEQ ID NO.1、2、3所示序列的引物在PCR反應(yīng)體系中初始物質(zhì)的量比例為1:1:2。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一所述的方法，其特征在于，BCR-ABL融合基因擴(kuò)增程序?yàn)椋?/p>

95℃，10min；

95℃30s，退火溫度65℃，30s，72℃75s，共20個(gè)循環(huán)，每個(gè)循環(huán)退火溫度降低0.5℃；

95℃30s，55℃30s，72℃75s，共25個(gè)循環(huán)；

72℃8min。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一所述的方法，其特征在于，所述COLD-PCR擴(kuò)增ABL激酶區(qū)的方法為：以BCR-ABL融合基因的擴(kuò)增產(chǎn)物為模板，以SEQ ID NO.3-5所示的核苷酸序列為引物，進(jìn)行COLD-PCR擴(kuò)增。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，COLD-PCR擴(kuò)增程序?yàn)椋?/p>

95℃，2min；

95℃10s，63℃30s，72℃10s，共5個(gè)循環(huán)；

95℃10s，69℃30s，73℃30s，63℃30s，72℃10s，共5個(gè)循環(huán)；其中73℃自首個(gè)循環(huán)起，每個(gè)循環(huán)升高0.2℃；

95℃10s，69℃30s，74℃30s，63℃30s，72℃10s，共45個(gè)循環(huán)；72℃5min。

7.一種檢測(cè)BCR-ABL融合基因ABL激酶區(qū)突變的試劑盒，其特征在于，含有SEQ ID NO.5所述的引物。

8.一種利用權(quán)利要求1-6任一所述的方法進(jìn)行工作的用于檢測(cè)BCR-ABL融合基因ABL激酶區(qū)突變的試劑盒。

9.一種適用于檢測(cè)BCR-ABL融合基因ABL激酶區(qū)突變的引物組合，其特征在于，其核苷酸序列分別如SEQ ID NO.1-5所示。

10.一種寡核苷酸，其特征在于，其如SEQ ID NO.5所示。