[發明專利]針對人胃組織制備單細胞懸液的解離試劑盒及方法

在審

• 申請號: 201811636608.8
• 申請日: 2018-12-29
• 公開（公告）號: CN109609440A
• 公開（公告）日: 2019-04-12
• 發明（設計）人: 陳岱
• 申請（專利權）人: 上海烈冰生物醫藥科技有限公司
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071
• 代理公司: 上海恒慧知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 31317
• 代理人: 徐紅銀;鄭義紅

本發明公開了一種針對人胃組織制備單細胞懸液的解離試劑盒及方法，所述試劑盒包括BufferE、對細胞裂解產生的DNA進行消化的酶A、用于消化組織中連接部分使其成為單個細胞的酶B、對多種組織類型進行消化的酶C和提高組織中液體滲透能力的酶D。本發明能夠更高效地從人胃組織中解離單細胞懸液，可重復性高，且得到的單細胞活力高、表位完整，不會影響后續實驗。

技術領域

本發明涉及細胞分子生物，具體地，涉及一種針對人胃組織制備單細胞懸液的解離試劑盒及胃組織單細胞懸液的制備方法。

背景技術

在生物醫藥領域的研究中，經常需要觀察和研究各個組織的單細胞的特性，因此，獲取各種組織的解離試劑盒有利于研究實驗的高效進行。

現有技術中，已經出現了不少的組織解離試劑盒，比如腫瘤組織解離試劑盒、新生鼠心臟解離試劑盒、骨骼肌、皮膚、腦、神經球等等，一般的組織解離試劑盒是通過采用特定的酶溶液，需要很好地保護細胞表面抗原，使得到的單細胞活力高、表位完整，不影響下游流式等實驗。

但是在檢索中，尚未發現有人胃組織制備單細胞懸液的解離試劑盒的報道。

發明內容

針對現有技術中的缺陷，本發明的目的主要是提供一種針對人胃組織制備單細胞懸液的解離試劑盒。

本發明的目的是通過以下技術方案來實現的：

本發明提供的第一個方面，是一種針對人胃組織制備單細胞懸液的解離試劑盒，所述試劑盒包括BufferE、對細胞裂解產生的DNA進行消化的酶A、用于消化組織中連接部分使其成為單個細胞的酶B、對多種組織類型進行消化的酶C和提高組織中液體滲透能力的酶D。

上述組分之間相互協調配合，能夠用于對人胃組織制備單細胞懸液，具體來說：

酶A—對細胞裂解產生的DNA進行消化，防止DNA纏繞導致細胞粘連；

酶B—主要用于哺乳動物組織細胞的分離，用于消化組織中連接部分使其成為單個細胞；

酶C—能夠對多種組織類型進行消化；

酶D—能夠提高組織中液體滲透能力，降低細胞間質的粘連。

優選地，所述酶A選用脫氧核糖核酸酶I(Deoxyribonuclease I，DNase I)；所述酶B選用I型膠原蛋白水解酶(Collagenase I)；所述酶C選用Ⅳ型膠原蛋白水解酶(Collagenase Ⅳ)；所述酶D選用透明質酸酶(hyaluronidase，HAase)。

優選地，所述BufferE選用Hanks平衡鹽溶液。

優選地，所述酶A、酶B、酶C和酶D均為凍干粉；所述解離試劑盒中酶A、酶B、酶C和酶D的凍干粉的重量比為(1-2):(32-48):(32-48):(8-12)；所述解離試劑盒中BufferE的體積與酶A、B、C、D凍干粉的總重的比值為20:(73-110)。

本發明提供的第二個方面，是一種利用針對人胃組織制備單細胞懸液的解離試劑盒制備胃組織單細胞懸液的方法，包括：

S1:酶溶液準備：

取部分Buffer E加入酶A凍干粉中得酶A溶液，分裝，凍存備用；所述酶A溶液濃度為0.5-1mg/ml；

取部分Buffer E加入酶B凍干粉中得酶B溶液，分裝，凍存備用；所述酶B溶液濃度為4-6mg/ml；

取部分Buffer E加入酶C凍干粉中得酶C溶液，分裝，凍存備用；所述酶C溶液濃度為4-6mg/ml；

取部分Buffer E加入酶D凍干粉中得酶D溶液，分裝，凍存備用；所述酶D溶液濃度為4-6mg/ml；