[發明專利]針對人胃組織制備單細胞懸液的解離試劑盒及方法在審

申請號：	201811636608.8	申請日：	2018-12-29
公開（公告）號：	CN109609440A	公開（公告）日：	2019-04-12
發明（設計）人：	陳岱	申請（專利權）人：	上海烈冰生物醫藥科技有限公司
主分類號：	C12N5/071	分類號：	C12N5/071
代理公司：	上海恒慧知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 31317	代理人：	徐紅銀;鄭義紅
地址：	200241 上海市***	國省代碼：	上海;31
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摘要：
搜索關鍵詞：	單細胞懸液試劑盒解離人胃消化制備液體滲透能力單個細胞可重復性細胞裂解組織類型表位
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【權利要求書】：

1.一種針對人胃組織制備單細胞懸液的解離試劑盒，其特征在于：所述試劑盒包括BufferE、對細胞裂解產生的DNA進行消化的酶A、用于消化組織中連接部分使其成為單個細胞的酶B、對多種組織類型進行消化的酶C和提高組織中液體滲透能力的酶D。

2.根據權利要求1所述的針對人胃組織制備單細胞懸液的解離試劑盒，其特征在于：所述酶A選用脫氧核糖核酸酶I；所述酶B選用I型膠原蛋白水解酶；所述酶C選用Ⅳ型膠原蛋白水解酶；所述酶D選用透明質酸酶。

3.根據權利要求1所述的針對人胃組織制備單細胞懸液的解離試劑盒，其特征在于：所述BufferE選用Hanks平衡鹽溶液。

4.根據權利要求1所述的針對人胃組織制備單細胞懸液的解離試劑盒，其特征在于：所述酶A、酶B、酶C和酶D均為凍干粉；所述解離試劑盒中酶A、酶B、酶C和酶D的凍干粉的重量比為(1-2):(32-48):(32-48):(8-12)；所述解離試劑盒中BufferE的體積與酶A、B、C、D凍干粉的總重的比值為20ml:(73-110)mg。

5.一種利用權利要求1-4任一項所述的解離試劑盒制備胃組織單細胞懸液的方法，其特征在于：包括：

S1:酶溶液準備：

取部分Buffer E加入酶A凍干粉中得酶A溶液，分裝，凍存備用；所述酶A溶液濃度為0.5-1mg/ml；

取部分Buffer E加入酶B凍干粉中得酶B溶液，分裝，凍存備用；所述酶B溶液濃度為4-6mg/ml；

取部分Buffer E加入酶C凍干粉中得酶C溶液，分裝，凍存備用；所述酶C溶液濃度為4-6mg/ml；

取部分Buffer E加入酶D凍干粉中得酶D溶液，分裝，凍存備用；所述酶D溶液濃度為4-6mg/ml；

S2：解離液制備：

將步驟S1中凍存備用的酶A溶液、酶B溶液、酶C溶液、酶D溶液進行混合，制得酶混合液，即解離液；

S3：胃組織單細胞懸液制備：

將培養基和所述解離液配制成含酶液混合液，加入到分離管中；將胃組織小塊加入分離管中，密封分離管，對組織進行解離，經細胞篩過濾，離心并洗滌細胞沉淀，于培養基中重懸細胞，即得所述胃組織單細胞懸液。

6.根據權利要求5所述的利用解離試劑盒制備胃組織單細胞懸液的方法，其特征在于：S2中，所述酶A溶液、酶B溶液、酶C溶液、酶D溶液的體積比為1:4:4:1。

7.根據權利要求5所述的利用解離試劑盒制備胃組織單細胞懸液的方法，其特征在于：S3中，將培養基和所述解離液按4:1的比例配制成含酶液混合液。