[發明專利]一種檢測心血管疾病用藥基因的試劑盒及檢測方法

有效

• 申請號: 201811634897.8
• 申請日: 2018-12-29
• 公開（公告）號: CN109868314B
• 公開（公告）日: 2020-03-03
• 發明（設計）人: 郭惠民;張郁;陳琦;張盼;胡志剛
• 申請（專利權）人: 浙江迪譜診斷技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12N15/11
• 代理公司: 杭州宇信知識產權代理事務所(普通合伙) 33231
• 代理人: 張宇娟

本發明屬于基因檢測技術領域，涉及一種檢測心血管疾病用藥基因的試劑盒及檢測方法，試劑盒包括11種基因17個突變位點的檢測試劑，針對11種基因出現的異常的基因變異位點，設計每個位點的擴增引物和單堿基延伸引物，通過多重PCR和多重單堿基延伸反應，進而進行質譜分析其特異性的產物，判定每一個位點的基因型，其檢測特異性強、靈敏度高，可應用于科研、藥物療效研究、心血管疾病相關調查、以及心血管臨床用藥指導。

技術領域

本發明屬于基因檢測技術領域，涉及一種檢測心血管疾病用藥基因的試劑盒，具體涉及 人類樣本中心血管疾病用藥相關的11種基因17個突變位點的檢測。針對十一種基因出現的 異常的基因變異位點，設計每個位點的擴增引物和單堿基延伸引物，通過多重PCR和多重單 堿基延伸反應，進而進行質譜分析其特異性的產物，判定每一個位點的基因型。

背景技術

心血管疾病嚴重威脅著中國人的健康，具有患者基數大，死亡率高的特點。根據《中國 心血管病報告2017》數據，我國心血管疾病患者約有2.9億人，其中腦卒中1300萬人，冠 心病1100萬人，心力衰竭450萬人，先天性心臟病200萬人，高血壓2.7億人。心血管疾病是居民因病死亡的首要因素，占居民疾病死亡總數的40％以上，高于腫瘤及其他疾病致死人 數。而在心血管臨床治療過程中發現，不同的心血管疾病患者對于藥物治療存在明顯差異。 導致個體差異的原因有很多，而遺傳因素是引起個體差異的重要原因。

臨床用藥經歷了經驗用藥階段，詢證用藥階段，到現在逐漸發展為個性化用藥階段。藥 物基因組學正是通過研究藥物代謝酶基因、藥物受體基因、藥物轉運蛋白基因等影響藥物作 用的遺傳因素，闡明不同基因型對藥物藥效和毒性的不同反應，進而為攜帶不同基因型的個 體臨床用藥提供指導。通過差異化的用藥指導，可以降低患者不良心血管事件發生的風險， 以期達到“精準醫療”、“個性化用藥”、“合理用藥”的目標。

心血管疾病藥物基因組學是當前熱點領域。一些主要的基因變異對華法林、氯吡格雷、 硝酸甘油、高血壓治療相關、他汀類等藥物的代謝、藥動學、藥效學有重要影響。許多基因 變異由全基因組關聯性研究發現，并經大型臨床隊列研究或隨機對照研究驗證，具有比較明 確的循證醫學證據。

華法林是香豆素類抗凝劑的一種，主要用于血栓栓塞性疾病的防治。華法林在臨床上較 為常用，但是其治療窗窄、個體用藥差異大，血藥濃度過高或敏感性增加可導致嚴重出血事 件，因此使用準確的劑量對于患者安全而言至關重要。氯吡格雷是一種抗血小板藥物，廣泛 用于急性冠脈綜合征、缺血性腦血栓、閉塞性脈管炎和動脈硬化及血栓栓塞引起的并發癥。 心臟支架手術后的患者需長期服用氯吡格雷以防止支架內再梗。氯吡格雷主要經CYP2C19代 謝活化后發揮抗血小板效應。氯吡格雷對血小板聚集的抑制作用存在很大的個體差異，血小 板抑制程度不足增加主要不良心血管事件風險，而過度抑制可增加出血風險。諸多證據表明 CYP2C19基因型與接受氯吡格雷治療的冠心病患者的臨床終點事件有相關性。自2009年《新 英格蘭醫學雜志》等權威雜志發表了包括全基因組關聯性研究在內的多篇文章，研究結果表 明氯吡格雷活化關鍵酶基因CYP2C19*2功能性等位基因丟失影響抗血小板效應和心血管不良 事件發生率。基于此，美國FDA在2010年3月發布了氯吡格雷抵抗的“黑框警告”：應用氯 吡格雷后出現主要心血管不良事件與CYP2C19無功能的等位基因有關。氯吡格雷在體內先是 轉化成無活性的二氧基氯吡格雷，再經第二步轉化成活性產物，CYP3A4/5、CYP2C19、CYP2B6 和CYP2B9等酶可能參與其代謝過程。其中，除CYP2C19酶在代謝中的作用得到明確證實外， 其余3種酶對氯吡格雷的活化是否有影響尚缺乏明確的理論依據。CYP2C19基因多態性較復 雜，其中*1為野生型，攜帶者酶功能正常，屬于快代謝型；CYP2C19*2、*3、*4、*5、*6、 *7、*8為缺失型，攜帶者酶功能異常，屬于慢代謝型；CYP2C19*17可增加酶的表達量，屬于 超快代謝型。攜帶上述任何2個慢代謝型等位基因的患者服用氯吡格雷后，體內活性代謝產 物的血漿濃度較低，血小板抑制率也較低，主要心血管不良事件發生率將明顯增加。