[發(fā)明專利]一種檢測(cè)心血管疾病用藥基因的試劑盒及檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811634897.8
• 申請(qǐng)日: 2018-12-29
• 公開（公告）號(hào): CN109868314B
• 公開（公告）日: 2020-03-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 郭惠民;張郁;陳琦;張盼;胡志剛
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江迪譜診斷技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/6883
• 分類號(hào): C12Q1/6883;C12N15/11
• 代理公司: 杭州宇信知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 33231
• 代理人: 張宇娟

1.一種檢測(cè)心血管疾病用藥基因的試劑盒，其特征在于：包括11種基因17個(gè)突變位點(diǎn)的檢測(cè)試劑，所述11種基因17個(gè)突變位點(diǎn)為VKORC1基因c.1173C>T和c.-1639G>A位點(diǎn)，CYP2C9基因c.430C>T和c.1075A>C位點(diǎn)；CYP2D6基因c.100C>T位點(diǎn)，ADRB1基因c.1165G>C位點(diǎn)，ACE基因I/D位點(diǎn)，AGTR1基因c.1166A>C位點(diǎn)，MTHFR基因C677T位點(diǎn)，SLCO1B1基因c.388A>G和c.521T>C位點(diǎn)，APOE基因c.388T>C和c.526C>T位點(diǎn)，CYP2C19基因c.681G>A、c.636G>A和c.-806C>T位點(diǎn)，ALDH2基因c.1510G>A位點(diǎn)；檢測(cè)所述11種基因17個(gè)突變位點(diǎn)的檢測(cè)試劑含有SEQ ID NO.1與SEQ ID NO.2，SEQ ID NO.3與SEQ ID NO.4，SEQ ID NO.5與SEQ IDNO.6，SEQ ID NO.7與SEQ ID NO.8，SEQ ID NO.9與SEQ ID NO.10，SEQ ID NO.11與SEQ IDNO.12，SEQ ID NO.13與SEQ ID NO.14，SEQ ID NO.15與SEQ ID NO.16，SEQ ID NO.17與SEQID NO.18，SEQ ID NO.19與SEQ ID NO.20，SEQ ID NO.21與SEQ ID NO.22，SEQ ID NO.23與SEQ ID NO.24，SEQ ID NO.25與SEQ ID NO.26，SEQ ID NO.27與SEQ ID NO.28，SEQ IDNO.29與SEQ ID NO.30或SEQ ID NO.31，SEQ ID NO.32與SEQ ID NO.33，SEQ ID NO.34與SEQ ID NO.35所示的引物對(duì)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種檢測(cè)心血管疾病用藥基因的試劑盒，其特征在于：所述11種基因17個(gè)突變位點(diǎn)的檢測(cè)試劑還包括單堿基延伸引物，所述單堿基延伸引物如SEQ IDNO.36～SEQ ID NO.52所示。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種檢測(cè)心血管疾病用藥基因的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒還包括PCR擴(kuò)增試劑，所述PCR擴(kuò)增試劑包含10×PCR Buffer with 20mM，25mM MgCl₂，25mM dNTP Mix，0.5μM Primer Mix和5U/μl PCR Enzyme。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種檢測(cè)心血管疾病用藥基因的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒還包括SAP酶消化處理試劑，所述SAP酶消化處理包括SAP Buffer和SAP Enzyme。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種檢測(cè)心血管疾病用藥基因的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒還包括單堿基延伸反應(yīng)試劑，所述單堿基延伸反應(yīng)試劑包括iPLEX Buffer、iPLEXTermination mix、Extend Primer Mix和iPLEX Enzyme。

6.權(quán)利要求1～5任一項(xiàng)所述試劑盒在制備用于檢測(cè)心血管疾病用藥相關(guān)基因的試劑中的應(yīng)用，其特征在于，包括如下步驟：

1)制備待測(cè)樣本基因組DNA，所以樣本為來源于人的，血液、唾液、口腔拭子、發(fā)根；

2)以提取的基因組DNA為模板，SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.35所示引物混合一管后進(jìn)行多重PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行SAP酶消化處理，再使用SEQ ID NO.36～SEQ ID NO.52所示單堿基延伸引物混合一管后進(jìn)行單堿基延伸反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后使用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜，最后Typer軟件分析檢測(cè)位點(diǎn)的基因型。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于：步驟2)中，所述PCR擴(kuò)增的條件為95℃預(yù)變性2min；95℃變性30s，60℃退火30s，72℃延伸60s，45個(gè)循環(huán)；72℃后延伸5min。