[發明專利]靶向抑制miR-34a的人工環狀RNA的通用表達框架、表達方法及其應用在審
| 申請號: | 201811634414.4 | 申請日: | 2018-12-29 |
| 公開(公告)號: | CN109554368A | 公開(公告)日: | 2019-04-02 |
| 發明(設計)人: | 張騰;羅衛峰;岳穎;趙玉曉;余衛國 | 申請(專利權)人: | 上海銳賽生物技術有限公司 |
| 主分類號: | C12N15/113 | 分類號: | C12N15/113;C12N15/63;A61K48/00;A61K31/7088;A61P3/04;A61P3/06;A61P3/10;A61P1/16 |
| 代理公司: | 上海三方專利事務所 31127 | 代理人: | 吳瑋;楊懿 |
| 地址: | 201315 上海市浦東新*** | 國省代碼: | 上海;31 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 靶向抑制 環狀RNA 通用 脂肪肝 應用 真核表達質粒 逆轉錄病毒 細胞內表達 腺相關病毒 高脂血癥 上游序列 生物功能 下游序列 中間序列 慢病毒 腺病毒 介導 質粒 肥胖 制備 糖尿病 病毒 攜帶 | ||
1.一種式I序列的靶向抑制miR-34a的人工環狀RNA的通用表達框架,
其中,
US為上游序列,堿基序列如SEQ ID NO.1所示,
DS為下游序列,堿基序列如SEQ ID NO.2所示,
34inh為miR-34a-5p的吸附抑制位點的序列,堿基序列如SEQ ID NO.3所示,
LS為連接序列,堿基序列如SEQ ID NO.4所示,
n個miR-34a-5p吸附位點序列通過連接序列連接并隔離,避免相鄰兩個吸附位點之間的干擾,n為自然數,
IS為環狀RNA的鑒定序列,堿基序列如SEQ ID NO.5所示,用于環狀RNA鑒定引物的結合。
2.如權利要求1所述的人工環狀RNA的通用表達框架,其特征在于所述的連接序列為GTGTGT。
3.如權利要求1所述的人工環狀RNA的通用表達框架,其特征在于miR-34a-5p吸附抑制位點的序列由人源miR-34a-5p的反向互補DNA序列決定,亦可模擬microRNA與靶基因結合的原則對個別堿基進行優化調整或對吸附位點堿基數進行合理調整。
4.如權利要求1所述的人工環狀RNA的通用表達框架,其特征在于5≤n≤50。
5.一種靶向抑制miR-34a的人工環狀RNA分子rs-ciR34-10的通用表達框架,其特征在于堿基序列如SEQ ID NO.6所示。
6.一種靶向抑制miR-34a的人工環狀RNA分子rs-ciRscramble-10的通用表達框架,其特征在于堿基序列如SEQ ID NO.7所示。
7.權利要求1~6所述任一人工環狀RNA的通用表達框架的表達方法,其特征在于利用真核質粒表達系統、慢病毒表達系統、腺病毒表達系統、腺相關病毒表達系統或逆轉錄表達系統表達。
8.一種靶向抑制miR-34a的人工環狀RNA,其特征在于由權利要求1~7所述任一人工環狀RNA的通用表達框架利用真核質粒表達系統、慢病毒表達系統、腺病毒表達系統、腺相關病毒表達系統或逆轉錄表達系統表達。
9.如權利要求1~7所述任一人工環狀RNA的通用表達框架在制備肥胖、脂肪肝、高脂血癥和糖尿病的藥物中的應用。
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