[發(fā)明專(zhuān)利]一種功能增強(qiáng)的通用型CAR-T細(xì)胞及其制備方法和用途

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811634010.5
• 申請(qǐng)日: 2018-12-29
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109652378B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-04-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 莫文俊;羅敏;李光超;邱玉信;周兆;郭錦濤;丁雯
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 廣州百暨基因科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12N5/10
• 分類(lèi)號(hào): C12N5/10;C12N15/113;C12N15/867;A61K35/17;A61P35/00;A61P35/02;A61P37/02
• 代理公司: 北京市萬(wàn)慧達(dá)律師事務(wù)所 11111
• 代理人: 謝敏楠;張孟迪

本發(fā)明提供了一種同時(shí)抑制T細(xì)胞抗原受體(TCR)、主要組織相容性復(fù)合體(MHCⅠ)及免疫抑制分子相關(guān)基因的CAR?T細(xì)胞及其制備方法。所述的CAR?T細(xì)胞表達(dá)嵌合抗原受體(CAR)，且不表達(dá)TCR、MHCⅠ和免疫抑制分子PD1，不僅適用異種受體，具有通用性，同時(shí)具有更強(qiáng)的殺傷力。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于醫(yī)藥、生物細(xì)胞學(xué)和分子生物學(xué)領(lǐng)域，涉及免疫治療領(lǐng)域。具體地，涉及采用PTG(Polycistronic tRNA-gRNA)同時(shí)敲除T細(xì)胞的TCR、B2M和PD1基因，并引入嵌合抗原受體(CAR)，以獲得功能增強(qiáng)的通用型CAR-T細(xì)胞。

背景技術(shù)

近幾年，腫瘤免疫治療進(jìn)入了快速發(fā)展階段，CAR-T療法作為其中一種重要的方法在血液學(xué)惡性腫瘤治療中取得了非常令人鼓舞的結(jié)果。目前，國(guó)內(nèi)越來(lái)越的企業(yè)、醫(yī)院及學(xué)術(shù)機(jī)構(gòu)加入到這一研究領(lǐng)域中，共同推進(jìn)CAR-T療法的發(fā)展，探索更為廣泛的潛在應(yīng)用價(jià)值。

目前，在嵌合抗原受體T細(xì)胞(CAR-T)治療領(lǐng)域，主要是采用自體的CAR-T細(xì)胞進(jìn)行治療，基本過(guò)程是采集患者自己的外周血，分離T細(xì)胞，并完成CAR-T細(xì)胞的制備和回輸。因受限于免疫系統(tǒng)自身的某些限制性因素，如CAR-T異體回輸時(shí)由于免疫原性等原因?qū)е碌拿庖吲懦狻⒁浦参锟顾拗鞣磻?yīng)(GVHD)等，這將限制CAR-T細(xì)胞治療技術(shù)廣泛性和便捷性應(yīng)用，同時(shí)也在一定程度上提高了該技術(shù)的成本，另外，對(duì)于嬰兒患者、或者70歲以上的老年患者，或者一些經(jīng)過(guò)多次放化療而摧毀免疫系統(tǒng)或者使T細(xì)胞功能弱化的腫瘤患者，其自體的T細(xì)胞的質(zhì)量和數(shù)量達(dá)不到要求，是不適合制備CAR-T進(jìn)行腫瘤治療的。所以，通用型CAR-T技術(shù)將是今后的一個(gè)方向，在基因編輯技術(shù)如ZFN(zinc-finger nucleases)、TALEN(transcription activator-like effector nucleases)和CRISPER-Cas9等的進(jìn)步下，如果能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)健康供體來(lái)源的T細(xì)胞TCR及其他導(dǎo)致不同個(gè)體間免疫原性的基因的敲除，將會(huì)使CAR-T這一技術(shù)真正成為一種活的藥物，進(jìn)而能夠廣泛而方便的供合適的患者使用，實(shí)現(xiàn)CAR-T細(xì)胞治療的產(chǎn)業(yè)化，并極大地降低成本。

目前，已研究出通用型的CAR-T(universal-CAR-T,uCAR-T)細(xì)胞。如Cellectis的UCART19也是一種同種異體CAR-T細(xì)胞療法，基于Talen基因編輯TCR-α鏈的表達(dá)，不需要依據(jù)患者進(jìn)行相應(yīng)修飾，而是直接將來(lái)源于非患者(non-patient)供體的T細(xì)胞進(jìn)行工程化，用于多個(gè)患者的治療。通用型的CAR-T細(xì)胞也并非完美無(wú)缺，如存在供體隱匿性感染問(wèn)題；基因的敲除并不能完全消除雙相排斥作用；uCAR-T細(xì)胞庫(kù)的數(shù)量、復(fù)蘇和代次問(wèn)題，對(duì)臨床應(yīng)用和治療效果會(huì)有一定的影響；基因的“脫靶”效應(yīng)可能會(huì)影響一些潛在的安全性問(wèn)題。面對(duì)這些可能存在的問(wèn)題，許中偉、黃曉軍等人則沒(méi)有采用基因編輯，而是采集患者的親屬的健康T細(xì)胞，該種方法無(wú)需細(xì)胞的冷凍復(fù)蘇，無(wú)需抽患者血液，同時(shí)適度的GLV的存在也可以增強(qiáng)T細(xì)胞的殺傷力。

T細(xì)胞(抗原)受體(T cell receptor,TCR)為所有T細(xì)胞表面的特征性標(biāo)志，以非共價(jià)鍵與CD3結(jié)合，形成TCR-CD3復(fù)合物。TCR的作用是識(shí)別抗原。TCR是由兩條不同肽鏈構(gòu)成的異二聚體，由α、β兩條肽鏈組成，分別由TRAC和TRBC基因表達(dá)。TCR敲除的T淋巴細(xì)胞在回輸入同種異體病人時(shí)不會(huì)引起移植物抗宿主病(GVHD)。