[發明專利]一種功能增強的通用型CAR-T細胞及其制備方法和用途

有效

• 申請號: 201811634010.5
• 申請日: 2018-12-29
• 公開（公告）號: CN109652378B
• 公開（公告）日: 2020-04-24
• 發明（設計）人: 莫文俊;羅敏;李光超;邱玉信;周兆;郭錦濤;丁雯
• 申請（專利權）人: 廣州百暨基因科技有限公司
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/113;C12N15/867;A61K35/17;A61P35/00;A61P35/02;A61P37/02
• 代理公司: 北京市萬慧達律師事務所 11111
• 代理人: 謝敏楠;張孟迪

1.一種通用型CAR-T細胞，所述通用型CAR-T細胞中同時敲除了T細胞抗原受體TCR的TRBC基因，組織相容性復合體MHC的B2M基因，以及PD1基因；

其中，采用SEQ ID NO:4所示的sgRNA敲除TRBC基因；采用SEQ ID NO:6所示的sgRNA敲除B2M基因；采用SEQ ID NO:11所示的sgRNA敲除PD1基因。

2.根據權利要求1所述的通用型CAR-T細胞，通過CRISPR/Cas9系統的方法進行TCR、B2M和PD1基因的敲除獲得通用型CAR-T細胞。

3.根據權利要求1所述的通用型CAR-T細胞，所述CAR靶向CD19。

4.根據權利要求3所述的通用型CAR-T細胞，所述的CAR具有SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列，或者SEQ ID NO:17所示的核酸序列。

5.權利要求1-4任一所述的通用型CAR-T細胞制備方法，其包括以下步驟：

1)得到活化的T細胞；

2)用編碼靶向CD19的CAR的慢病毒載體來轉染步驟1)的T細胞，獲得靶向不同疾病分子的CAR-T細胞；所述靶向CD19的CAR具有SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列；

3)將步驟2)獲得的CAR-T細胞通過CRISPR/Cas9系統的方法進行TCR、B2M和PD1基因的敲除獲得通用型CAR-T細胞；

其中，步驟2)和3)順序可互換或同時進行。

6.權利要求1-4任一所述通用型CAR-T細胞，或者權利要求5所述方法在制備治療B細胞系惡性腫瘤的藥物中的應用。

7.根據權利要求6所述應用，所述的B細胞系惡性腫瘤選自非霍奇金淋巴瘤、慢性淋巴細胞白血病、急性淋巴細胞白血病或多發性骨髓瘤。

8.一種藥物組合物，所述的藥物組合物包含權利要求1-4任一所述的通用型CAR-T細胞。

9.根據權利要求8所述藥物組合物，所述的藥物組合物還包括藥學上可接受的載體。