[發(fā)明專利]一種臨床診斷試劑用卵黃抗體的制備方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811631706.2
• 申請(qǐng)日: 2018-12-28
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111378032A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-07-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王耀;劉文進(jìn)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 埃格生物科技（常州）有限公司
• 主分類號(hào): C07K16/02
• 分類號(hào): C07K16/02;C07K1/14;C07K1/34
• 代理公司: 南京勤行知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 32397
• 代理人: 呂波

本發(fā)明公開(kāi)了一種臨床診斷試劑用卵黃抗體的制備方法，屬于生物抗體制劑領(lǐng)域。本發(fā)明收集合格的雞蛋卵黃，對(duì)雞蛋卵黃稀釋及酸化，再通過(guò)加入氣相二氧化硅對(duì)酸化卵黃液進(jìn)行徹底脫脂，進(jìn)一步地通過(guò)深層過(guò)濾、超濾純化濃縮、冷凍干燥工藝制備成為凍干的臨床診斷試劑用卵黃抗體。該方法生產(chǎn)的凍干卵黃抗體是臨床診斷用哺乳動(dòng)物抗體的優(yōu)良替代原料，有易溶于水、高靈敏、使用便捷安全的特點(diǎn)。本發(fā)明具有工藝簡(jiǎn)捷、環(huán)境友好，方法易于操作，產(chǎn)品安全性高等優(yōu)點(diǎn)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物抗體制劑領(lǐng)域，特別是一種臨床診斷試劑用卵黃抗體的制備方法。

背景技術(shù)

卵黃抗體IgY是從蛋黃中提取的免疫活性物質(zhì)，特定抗原免疫雞后，特異性卵黃抗高濃度蓄積于卵黃中，通過(guò)生物技術(shù)提取純化，最終應(yīng)用于臨床診斷試劑。卵黃抗體類似于哺乳動(dòng)物血清抗體IgG，但是以卵黃作為原料獲取卵黃抗體比哺乳動(dòng)物血清來(lái)源抗體具備極大優(yōu)勢(shì)。

傳統(tǒng)的人用診斷試劑抗體原料使用的是哺乳動(dòng)物原料來(lái)源抗體（羊，兔等），需要通過(guò)采集血液分離血清后獲得，存在主要的問(wèn)題是：需要相當(dāng)規(guī)模的養(yǎng)殖場(chǎng)所、需要采血獲得，不符合動(dòng)物福利原則、由于和人同屬哺乳動(dòng)物，存在檢測(cè)交叉因素，造成檢測(cè)靈敏度及精確度會(huì)受到干擾。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明需要解決的技術(shù)問(wèn)題是獲得抗體比哺乳動(dòng)物源抗體靈敏度高, 獲得來(lái)源廣泛便捷，可靈活擴(kuò)大生產(chǎn)規(guī)模。

為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明本發(fā)明提供了一種臨床診斷試劑用卵黃抗體的制備方法，具體步驟如下：

第一步：強(qiáng)化免疫，用臨床診斷指標(biāo)免疫原，按照特定程序免疫雞，雞所產(chǎn)雞蛋蓄積特定卵黃抗體；

第二步：效價(jià)檢測(cè)，對(duì)雞蛋卵黃進(jìn)行瓊脂雙向免疫擴(kuò)散效價(jià)檢測(cè)，收集合格所產(chǎn)雞蛋卵黃；

第三步：酸化，雞蛋卵黃用純化水稀釋、酸化，離心脫除大部分脂質(zhì)；

第四步：脫脂，用脫脂技術(shù)徹底去除殘留脂質(zhì)；

第五步：深層澄清過(guò)濾，取出脫脂后物料液中細(xì)小顆粒物質(zhì)；

第六步：切向流超濾純化及濃縮，卵黃抗體得到純化，同時(shí)物料液體積濃縮為純化水稀釋酸化前的水平；

第七步：低溫真空冷凍干燥，通過(guò)設(shè)定的程序進(jìn)行冷凍干燥，卵黃抗體成為凍干粉。

優(yōu)選的：第一步免疫雞的強(qiáng)化方法為：每間隔7~20天進(jìn)行強(qiáng)化免疫，按照抗原與佐劑等體積混合，多點(diǎn)注射雞胸肌或翼下肌肉0.5~1.5 ml，每次抗原劑量為10~1000 ug/只。

優(yōu)選的，第一步中所述佐劑為弗氏完全佐劑、弗氏不完全佐劑、天然來(lái)源佐劑、油乳佐劑、細(xì)胞因子佐劑、微生物佐劑、核酸佐劑、納米佐劑等。

優(yōu)選的，第二步雞蛋卵黃抗體效價(jià)檢測(cè)方法為：用0.85%生理鹽水加入雞蛋卵黃液中作梯度稀釋，在雞蛋卵黃檢測(cè)效價(jià)超過(guò)1：64，收集雞蛋，分離雞蛋卵黃

優(yōu)選的，第三步酸化方法為：按照雞蛋卵黃與純化水為1:5~1:9進(jìn)行稀釋，調(diào)節(jié)pH為5.0~6.0混勻攪拌，4℃靜止過(guò)夜，分離上清液，取上清液即為酸化卵黃液。

優(yōu)選的，第四步脫脂技術(shù)為：在酸化卵黃液中加入質(zhì)量濃度為1~20 g/l的氣相二氧化硅混勻后，離心收集上清液，取上清液即為完全脫脂卵黃抗體液。

優(yōu)選的，第五步深層澄清過(guò)濾步驟方法為：通過(guò)過(guò)濾壓差為0~4 bar的折疊濾芯或膜片過(guò)濾完全脫脂卵黃抗體液，取過(guò)濾液即為無(wú)顆粒澄清卵黃抗體液。

優(yōu)選的，第六步切向流超濾純化及濃縮步驟方法為：通過(guò)過(guò)濾壓差為0~4 bar、孔徑為10 ~50 kD的堆疊膜包超濾濃縮無(wú)顆粒澄清的卵黃抗體液，取濃縮液即為純化卵黃抗體液，純化卵黃抗體液體積為第二步加純化水稀釋前體積。