[發明專利]一種臨床診斷試劑用卵黃抗體的制備方法

在審

• 申請號: 201811631706.2
• 申請日: 2018-12-28
• 公開（公告）號: CN111378032A
• 公開（公告）日: 2020-07-07
• 發明（設計）人: 王耀;劉文進
• 申請（專利權）人: 埃格生物科技（常州）有限公司
• 主分類號: C07K16/02
• 分類號: C07K16/02;C07K1/14;C07K1/34
• 代理公司: 南京勤行知識產權代理事務所(普通合伙) 32397
• 代理人: 呂波

1.一種臨床診斷試劑用卵黃抗體的制備方法，其特征在于：具體步驟如下：

第一步：強化免疫，用臨床診斷指標免疫原，按照特定程序免疫雞，雞所產雞蛋蓄積特定卵黃抗體；

第二步：效價檢測，對雞蛋卵黃進行瓊脂雙向免疫擴散效價檢測，收集合格所產雞蛋卵黃；

第三步：酸化，雞蛋卵黃用純化水稀釋、酸化，離心脫除大部分脂質；

第四步：脫脂，用脫脂技術徹底去除殘留脂質；

第五步：深層澄清過濾，取出脫脂后物料液中細小顆粒物質；

第六步：切向流超濾純化及濃縮，卵黃抗體得到純化，同時物料液體積濃縮為純化水稀釋酸化前的水平；

第七步：低溫真空冷凍干燥，通過設定的程序進行冷凍干燥，卵黃抗體成為凍干粉。

2.按照權利要求1所述的一種臨床診斷試劑用卵黃抗體的制備方法，其特征在于：所述第一步免疫雞的強化方法為：每間隔7~20天進行強化免疫，按照抗原與佐劑等體積混合，多點注射雞胸肌或翼下肌肉0.5~1.5 ml，每次抗原劑量為10~1000 ug/只。

3.按照權利要求2所述的一種臨床診斷試劑用卵黃抗體的制備方法，其特征在于：所述第一步中所述佐劑為弗氏完全佐劑、弗氏不完全佐劑、天然來源佐劑、油乳佐劑、細胞因子佐劑、微生物佐劑、核酸佐劑、納米佐劑等。

4.按照權利要求1所述的一種臨床診斷試劑用卵黃抗體的制備方法，其特征在于：所述第二步雞蛋卵黃抗體效價檢測方法為：用0.85%生理鹽水加入雞蛋卵黃液中作梯度稀釋，在雞蛋卵黃檢測效價超過1：64，收集雞蛋，分離雞蛋卵黃。

5.按照權利要求1所述的一種臨床診斷試劑用卵黃抗體的制備方法，其特征在于：所述第三步酸化方法為：按照雞蛋卵黃與純化水為1:5~1:9進行稀釋，調節pH為5.0~6.0混勻攪拌，4℃靜置過夜，分離上清液，取上清液即為酸化卵黃液。

6.按照權利要求1所述的一種臨床診斷試劑用卵黃抗體的制備方法，其特征在于：所述第四步脫脂技術為：在酸化卵黃液中加入質量濃度為1~20 g/l的氣相二氧化硅混勻后，離心收集上清液，取上清液即為完全脫脂卵黃抗體液。

7.按照權利要求1所述的一種臨床診斷試劑用卵黃抗體的制備方法，其特征在于：所述第五步深層澄清過濾步驟方法為：通過過濾壓差為0~4 bar的折疊濾芯或膜片過濾完全脫脂卵黃抗體液，取過濾液即為無顆粒澄清卵黃抗體液。

8.按照權利要求1所述的一種臨床診斷試劑用卵黃抗體的制備方法，其特征在于：所述第六步切向流超濾純化及濃縮步驟方法為：通過過濾壓差為0~4 bar、孔徑為10 ~50 kD的堆疊膜包超濾濃縮無顆粒澄清的卵黃抗體液，取濃縮液即為純化卵黃抗體液，純化卵黃抗體液體積為第二步加純化水稀釋前體積。

9.按照權利要求1所述的一種臨床診斷試劑用卵黃抗體的制備方法，其特征在于：所述第七步低溫真空冷凍干燥步驟方法為：預凍條件為2~4小時內降至-50~ -80℃，維持2~4小時，然后設定每小時升溫4~8℃，抽真空狀態下凍干，獲得白色的卵黃抗體粉末。