[發明專利]一種檢測MTHFR基因rs1801133位點基因型的引物組、方法及試劑盒

有效

• 申請號: 201811630593.4
• 申請日: 2018-12-29
• 公開（公告）號: CN109517893B
• 公開（公告）日: 2022-04-19
• 發明（設計）人: 何震宇;黃曉婷;顧取良
• 申請（專利權）人: 廣東藥科大學
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/683;C12N15/11
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 胡輝;舒勝英

1.一種檢測MTHFR基因rs1801133多態位點的引物組，其特征在于，所述引物組由引物對1、2組成，上述所有引物對的具體序列如下：

引物對1

F1：AGTGTGGGAGTTTGGAGCAATC（SEQ ID NO：1），

R1：TGCCTCAGCTTCTCAAGTAGCC （SEQ ID NO：2）；

引物對2

F2：CTTTATGTTTTTGGCGTCTTCCAGGCCACCCCGAAGCAGGGAG（SEQ ID NO：3），

R2：

ATTTAGGTGACACTATAGTGTAAAACGACGGCCAGTGGGAGCTTATCGACTCTCCTGG（SEQ ID NO：4）。

2.一種檢測MTHFR基因rs1801133多態位點的試劑盒，其特征在于，該試劑盒中含有權利要求1所述的引物組。

3.根據權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，該試劑盒中還含有限制性核酸內切酶HinfI以及TaqI。

4.一種非診斷目的檢測MTHFR基因rs1801133多態位點的方法，其特征在于，包括以下步驟：

1）通過巢式PCR擴增跨越該多態位點的靶序列，所述巢式PCR的引物由引物對1、2組成，其中引物對1為外引物對，引物對2為內引物對；

2）利用限制性核酸內切酶對巢式PCR產物進行酶切；

3）將酶切產物進行瓊脂糖凝膠電泳，根據電泳圖譜的特征條帶確定樣品基因型；

上述所有引物對的具體序列如下：

引物對1

F1：AGTGTGGGAGTTTGGAGCAATC（SEQ ID NO：1），

R1：TGCCTCAGCTTCTCAAGTAGCC （SEQ ID NO：2）；

引物對2

F2：CTTTATGTTTTTGGCGTCTTCCAGGCCACCCCGAAGCAGGGAG（SEQ ID NO：3），

R2：ATTTAGGTGACACTATAGTGTAAAACGACGGCCAGTGGGAGCTTATCGACTCTCCTGG（SEQ ID NO：4）。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述的樣品為細胞樣品。

6.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述的限制性核酸內切酶為限制性核酸內切酶HinfI以及TaqI。

7.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述巢式PCR的操作為，先用外引物對1進行第1輪PCR擴增，將該輪擴增產物作為模板再用內引物對2進行第2輪PCR擴增。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，第1輪PCR體系為：ddH₂O 3.6 μL、2×TransDirect^? PCR SuperMix (+dye) 5.0 μL、樣品細胞1 μL、 10pmol/μL SEQ ID NO：1所示的引物F1 0.2 μL、10pmol/μL SEQ ID NO：2所示的引物R1 0.2 μL；

第1輪PCR擴增程序為：94℃、8min；94℃、30s，57℃、30s，72℃、40s，35個循環；72℃、7min。