[發明專利]心肌損傷標志物MMPs、TIMPs及cTnI檢測試劑盒及檢測方法

在審

• 申請號: 201811620176.1
• 申請日: 2018-12-28
• 公開（公告）號: CN109470848A
• 公開（公告）日: 2019-03-15
• 發明（設計）人: 吳偉東;劉清峰;姜峰
• 申請（專利權）人: 廣州市紅十字會醫院（暨南大學醫學院附屬廣州紅十字會醫院）
• 主分類號: G01N33/533
• 分類號: G01N33/533;G01N33/577;G01N33/558
• 代理公司: 北京科家知識產權代理事務所(普通合伙) 11427
• 代理人: 陳娟

本發明涉及一種醫學檢測技術領域，尤指一種心肌損傷標志物MMPs、TIMPs及cTnI檢測試劑盒及檢測方法，所述試劑盒主要組成：熒光標記探針、抗MMPs、TIMPs及cTnI單克隆抗體、抗鼠IgG抗體、固相膜、檢測卡，本發明首先建立MMPs、TIMPs并結合cTnI的檢測，用于心肌損傷的組合檢測和診斷方案，優于傳統心衰標志物配組，為臨床判斷心肌梗死和基質重構相關的心力衰竭提供更準確的科學依據，其次基于熒光膠乳免疫層析定量技術的免疫層析熒光定量檢測方法，組合及分別檢測MMPs、TIMPs及cTnI，心肌損傷檢測體系，建立了免疫層析，熒光定量檢測方法，突破傳統的酶聯免疫法（ELISA），率先在國內建立基于熒光膠乳免疫層析定量技術的心肌損傷檢測體系，具有快速、準確、靈敏度高、特異性高的特點。

技術領域

本發明涉及一種醫學檢測技術領域，尤指一種心肌損傷標志物MMPs、TIMPs及cTnI檢測試劑盒及檢測方法。

背景技術

過去認為心臟重構只是由于心肌細胞內源性的變化，現在認識到心肌細胞外基質中膠原的數量、組成和結構的變化也參與了心臟重構，即基質組織修復再生的過程，并且是心室重構的重要原因，又稱為心肌基質重構；心肌基質重構是決定心臟病患者心功能及其預后的主要因素之一，是心臟基質成分合成或降解代謝失平衡的結果，心臟基質在維持心臟結構和功能完整性方面起著重要的作用；基質組織修復再生引起心肌纖維化和進行性心室擴張，最終導致心力衰竭。

基質金屬蛋白酶（matrixmetalloproteinase,MMPs）在心肌中存在的能降解所有心臟基質成分，是重構過程中心臟基質降解的主要因素；在衰竭的心臟中，MMPs活性升高導致纖維膠原降解、細胞外基質重構，導致左室進行性擴張、收縮功能逐漸下降，MMPs在轉錄前和轉錄后水平都可被調節，而且可以通過底物間的相互作用和通過內源性生理抑制劑即基質金屬蛋白酶組織抑制劑（tissue inhibitor of metalloproteinase, TIMps）來調節；因此MMPs、TIMPs及其調節因子間的相互作用決定了心肌纖維化過程的進展，調節心肌MMPs、TIMPs的表達和活性，成為控制心衰進展中心臟基質的組織修復和再生的重要治療手段。

經多項研究表明，MMPs、TIMPs在心肌損傷中，較以往所檢測的標志物而言，具有更加敏感，更加準確地反映心肌損傷程度的特性；但是目前國內對心機損傷標志物以及MMPs、TIMPs的檢測方法均步驟繁多，檢測速度慢，硬件要求高，且價格成本非常昂貴，大多限于在中心實驗室使用，不能滿足臨床快速診斷、準確診斷的要求和大管理的需求，同時在基層醫院、現場急救大規模推廣應用方面也受到嚴重制約；因此研究相關簡便低耗的新型檢測方式及開發新型、低成本、簡便易用的檢測產品成為快速診斷的重要戰略問題。

發明內容

為解決上述問題，本發明旨在公開一種醫學檢測技術領域，尤指一種心肌損傷標志物MMPs、TIMPs及cTnI檢測試劑盒及檢測方法。

為實現上述目的，本發明采用的技術方案是：

一種心肌損傷標志物MMPs、TIMPs及cTnI試劑盒，其特征在于，所述試劑盒主要組成：熒光標記探針、抗MMPs、TIMPs及cTnI單克隆抗體、抗鼠IgG抗體、固相膜、檢測卡。

優選地，所述熒光標記探針為納米級高保真熒光標記探針；其制備方法為：利用膠乳表面的羧基與蛋白質的胺基連接，將蛋白質連接到膠乳顆粒的表面以制備熒光標記探針。

優選地，所述抗MMPs、TIMPs及cTnI單克隆抗體為熒光膠乳微粒標記抗MMPs、TIMPs及cTnI單克隆抗體，其制備方法包括：

1）將熒光膠乳微球溶解于磷酸緩沖液中；

2）加入N-羥基硫代琥珀酰亞胺和碳化二亞胺，進行超聲清洗，時間為30S；

3）放置于室溫避光孵育30min以進行活化；