[發(fā)明專利]超級(jí)肥胖小鼠的構(gòu)建與鑒定方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811618131.0
• 申請(qǐng)日: 2018-12-28
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111374093A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-07-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 高倩;呂慎金;侯軍峰
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 高倩
• 主分類號(hào): A01K67/027
• 分類號(hào): A01K67/027;C12Q1/6888;C12Q1/6806;G01N33/92
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

本發(fā)明公開(kāi)了超級(jí)肥胖小鼠的構(gòu)建與鑒定方法，包括雄性PPARα?/?小鼠、雌性O(shè)B/ob小鼠、PCR擴(kuò)增儀、DNA擴(kuò)增產(chǎn)物、2%瓊脂糖凝膠電泳、鑒定依據(jù)、瘦素基因，所述PCR擴(kuò)增儀的內(nèi)部設(shè)置有PCR試劑盒，所述PCR試劑盒的內(nèi)部設(shè)置有原料，所述原料包括DNA雙鏈、DNA單鏈、引物、TapDNA聚合酶、腺嘌呤脫氧核苷酸、鳥(niǎo)嘌呤脫氧核苷酸、胞嘧啶脫氧核苷酸、胸腺嘧啶脫氧核苷酸，所述鑒定依據(jù)包括白色脂肪組織、棕色脂肪組織、甘油三酯、膽固醇、肝臟、脂肪肝、葡萄糖、胰島素。本發(fā)明還公開(kāi)了超級(jí)肥胖小鼠的鑒定方法。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：PPARα^Δob/ob超級(jí)肥胖小鼠為研究肥胖及其代謝綜合癥以及PPARα信號(hào)通路在肥胖發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的作用研究提供了更加理想的模型。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體為超級(jí)肥胖小鼠的構(gòu)建與鑒定方法。

背景技術(shù)

隨著物質(zhì)生活水平的提高和生活模式的改變，肥胖、高血壓、高血脂、糖尿病、動(dòng)脈粥樣硬化等代謝綜合癥已嚴(yán)重危害了人類的健康，目前，用于研究肥胖及其代謝綜合癥的試驗(yàn)動(dòng)物模型主要包括自發(fā)型、誘發(fā)型和遺傳修飾型肥胖動(dòng)物模型，常用的自發(fā)性肥胖小鼠模型主要有ob/ob小鼠、db/db小鼠、Yellow（Ay/a）小鼠等，其中，ob/ob小鼠肥胖的發(fā)生與6號(hào)常染色體上的瘦素基因突變有關(guān)，其特征為貪食、中等肥胖、高血糖、高胰島素、高血脂、葡萄糖和胰島素抵抗、代謝率低、脂肪肝等，而db/db小鼠是由位于4號(hào)常染色體上的Leptin受體基因突變誘導(dǎo)的自發(fā)型II型糖尿病小鼠，其特征與ob/ob小鼠相似，此外，ob/ob和db/db小鼠的肥胖特征均以常染色體隱性方式遺傳，且與人類肥胖癥及II型糖尿病的病理特征非常相似，Yellow（Ay/a）小鼠與位于2號(hào)常染色體上的毛色調(diào)控基因ASIP突變有關(guān)，其特征為飲食亢進(jìn)、代謝率低、肥胖、癌癥等，且其肥胖程度隨毛色深度增加而增加，自發(fā)型肥胖小鼠模型可廣泛應(yīng)用于能量代謝紊亂調(diào)控機(jī)制、肥胖及糖尿病等代謝綜合癥的藥物研發(fā)等方面的研究，但該類小鼠模型多為單基因突變引發(fā)的遺傳性肥胖模型，具有隨機(jī)性、不可控性等特點(diǎn)，而人類肥胖罕有單基因突變，多為多基因相關(guān)，且受環(huán)境因素影響較大。誘發(fā)型肥胖動(dòng)物模型主要通過(guò)高能飲食誘導(dǎo)，如高脂、高糖日糧等，該類模型可模擬高能量飲食的環(huán)境因素，與人類肥胖具有較好的可比性，然而，動(dòng)物對(duì)高能膳食誘導(dǎo)肥胖的易感性存在個(gè)體差異，因此，篩選并建立純系肥胖動(dòng)物模型至關(guān)重要，為此我們提出了超級(jí)肥胖小鼠的構(gòu)建與鑒定方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題在于增加額外的播放時(shí)延并且播放流暢度較差，對(duì)于播放過(guò)程中的網(wǎng)絡(luò)狀態(tài)不能夠及時(shí)向編碼端傳遞，產(chǎn)生過(guò)度跳幀導(dǎo)致的畫面質(zhì)量下降的現(xiàn)象和緩沖區(qū)過(guò)度擴(kuò)大導(dǎo)致的播放時(shí)延的問(wèn)題。

本發(fā)明采用以下技術(shù)方案解決上述技術(shù)問(wèn)題：提供了超級(jí)肥胖小鼠的構(gòu)建與鑒定方法，包括雄性PPARα-/-小鼠、雌性O(shè)B/ob小鼠、PCR擴(kuò)增儀、DNA擴(kuò)增產(chǎn)物、2%瓊脂糖凝膠電泳、鑒定依據(jù)、瘦素基因，所述PCR擴(kuò)增儀的內(nèi)部設(shè)置有PCR試劑盒，所述PCR試劑盒的內(nèi)部設(shè)置有原料，所述原料包括DNA雙鏈、DNA單鏈、引物、TapDNA聚合酶、腺嘌呤脫氧核苷酸、鳥(niǎo)嘌呤脫氧核苷酸、胞嘧啶脫氧核苷酸、胸腺嘧啶脫氧核苷酸，所述鑒定依據(jù)包括白色脂肪組織、棕色脂肪組織、甘油三酯、膽固醇、肝臟、脂肪肝、葡萄糖、胰島素。

優(yōu)選的，所述雄性PPARα-/-小鼠與雌性O(shè)B/ob小鼠雜交得到雄性PPARα+/-/OB/ob雙雜合子小鼠與雌性PPARα+/-/OB/ob雙雜合子小鼠，所述雄性PPARα+/-/OB/ob雙雜合子小鼠與雌性PPARα+/-/OB/ob雙雜合子小鼠雜交得到PPARα?ob/ob小鼠、PPARα野生型小鼠、雜合子小鼠、純合子敲除小鼠、ob野生型、雜合子小鼠、純合子敲除小鼠。

優(yōu)選的，所述PPARα?ob/ob小鼠的內(nèi)部含有基因重組DNA。

優(yōu)選的，所述DNA雙鏈解離得到DNA單鏈，所述DNA單鏈通過(guò)引物與TapDNA聚合酶的作用與腺嘌呤脫氧核苷酸、鳥(niǎo)嘌呤脫氧核苷酸、胞嘧啶脫氧核苷酸、胸腺嘧啶脫氧核苷酸結(jié)合得到DNA擴(kuò)增產(chǎn)物。