[發(fā)明專利]一種復合體系及其檢測不平衡混合檢材的方法和應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811617425.1
• 申請日: 2018-12-28
• 公開（公告）號: CN109576378B
• 公開（公告）日: 2020-10-23
• 發(fā)明（設計）人: 梁偉波;張林;王莉;蹇慧;呂梅勵
• 申請（專利權(quán)）人: 四川大學
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12N15/11
• 代理公司: 成都正華專利代理事務所(普通合伙) 51229
• 代理人: 何凡;郭艷艷

本發(fā)明公開了一種復合體系及其檢測不平衡混合檢材的方法和應用。該復合體系包括擴增18個SNP?STR位點的引物，每個位點包括一條共用后引物和兩條增加突變的特異性前引物，具體序列見SEQ ID NO.1～54。本發(fā)明建立的SNP?STR復合擴增體系，簡化了操作過程，能在現(xiàn)有法醫(yī)物證常規(guī)檢驗設備的基礎上廣泛使用，對法醫(yī)現(xiàn)場二人混和樣本進行檢測，同一STR分型樣本區(qū)分，無創(chuàng)產(chǎn)前診斷和無創(chuàng)產(chǎn)前親子鑒定，提供了新的技術手段，為破案提供線索與證據(jù)。

技術領域

本發(fā)明屬于法醫(yī)檢測技術領域，具體涉及一種復合體系及其檢測不平衡混合檢材的方法和應用。

背景技術

在法醫(yī)物證檢驗所需要分析的各類檢材中，混合檢材是重要的常見檢材之一。混合檢材的復雜程度隨著組成個體的數(shù)量增加而增加，同時其檢測難度也會隨著組成成分DNA占比變化而不同。

分析鑒定混合檢材的關鍵在于對不同組分的信息進行有效分離。目前在實際案件工作中分析混合檢材的方法主要有三種：

(1)在DNA提取階段將組成成分分離后再進行檢測，如精液-陰道分泌液混合檢材，一般采用差異裂解法提取男性精子細胞DNA從而獲得男性成分DNA分型。但在此方法中，女性成分可能會因男性上皮細胞的存在而無法分離。另外，通過細胞分離技術或顯微切割技術直接分離混合檢材中組成成分的細胞，但由于這類方法對檢材質(zhì)量以及實驗設備等方面要求較高，限制了其應用推廣。

(2)在DNA擴增階段進行分離，此階段主要通過使用特殊遺傳標記來實現(xiàn)，如利用男性特有的Y-STR遺傳標記對男-女性混合檢材中男性成分Y染色體信息進行分析，但由于此類標記為父系遺傳且屬于單倍型，不能直接用于個人識別，也無法用于男-男及女-女混合檢材。除Y-STR外，還有線粒體DNA(Mitochondrial DNA，mtDNA)，但由于mtDNA具有異質(zhì)性，為母系遺傳并屬于單倍型，不能直接用于組成成分的個體識別。

STR位點和與之物理距離很近的DIP(Deletion/Insertion polymorphism，缺失/插入多態(tài)性)位點遺傳時相互連鎖形成復合連鎖遺傳標記DIP-STR，能夠?qū)Ρ壤哌_1:1000的不平衡混合檢材中次要成分進行分析，不受主要成分的影響，而且不受混合檢材性別組成的限制，能同時獲得DIP和STR的分型，具有比STR更高的多態(tài)性。但是，DIP-STR在基因組中分布較少，法醫(yī)DNA分析中常規(guī)使用的STR基因座核心重復序列側(cè)翼區(qū)都沒有DIP分布，因此該標記無法與現(xiàn)有的STR數(shù)據(jù)庫進行比對，實用性受到限制。

(3)在混合檢材DNA分型結(jié)果得出后，對組成成分的分型進行分離分析，此類方法主要依賴于法醫(yī)統(tǒng)計學和概率軟件完成，容易受混合檢材比例和擴增過程中隨機效應的影響。如果混合檢材不平衡比例過大，擴增階段已造成低比例成分被高比例成分遮蓋，分型圖譜低比例成分信息出現(xiàn)過少甚至不會顯示出低比例成分信息，統(tǒng)計學方法和軟件的使用將會受到限制。

目前對不平衡混合檢材的分析在實際工作中還沒有行之有效的解決方法和手段，不平衡混合檢材中少量成分的分離分析仍在研究當中。

發(fā)明內(nèi)容

針對現(xiàn)有技術中的上述不足，本發(fā)明提供一種復合體系及其檢測不平衡混合檢材的方法和應用，能夠用于法醫(yī)現(xiàn)場案件混合樣本的檢測。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明解決其技術問題所采用的技術方案是:

一種復合體系，該復合體系包括擴增18個SNP-STR位點的引物，每個位點包括一條共用后引物和兩條增加突變的特異性前引物；