[發明專利]一種復合體系及其檢測不平衡混合檢材的方法和應用

有效

• 申請號: 201811617425.1
• 申請日: 2018-12-28
• 公開（公告）號: CN109576378B
• 公開（公告）日: 2020-10-23
• 發明（設計）人: 梁偉波;張林;王莉;蹇慧;呂梅勵
• 申請（專利權）人: 四川大學
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12N15/11
• 代理公司: 成都正華專利代理事務所(普通合伙) 51229
• 代理人: 何凡;郭艷艷

1.一種復合體系，其特征在于，所述復合體系包括擴增以下18個SNP-STR位點的引物，每個位點包括一條共用后引物和兩條增加突變的特異性前引物；所述SNP-STR位點包括rs11642858-D16S539、rs58390469-D2S441、rs2325399-D6S1043、rs2070018-FGA、rs25768-D5S818、rs9531308-D13S317、rs17651965-CSF1PO、rs4847015-D1S1656、rs7962284-D12S391、rs7275705-PentaD、rs7786079-D7S820、rs57346531-D8S1179、rs8031604-PentaE、rs2246512-D10S1248、rs17077990-D3S1358、rs6736691-D2S1338、rs13413321-TPOX，以及rs9362476-SE33；

引物具體序列如SEQ ID NO.1～54所示。

2.一種利用權利要求1所述復合體系檢測不平衡混合檢材的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)分別提取待檢混合檢材、受害者以及嫌疑人的DNA；

(2)采用權利要求1中所述復合體系對提取的受害者以及嫌疑人的DNA進行PCR擴增，獲得SNP-STR基因分型，在此基礎上篩選出SNP-STR等位基因有效位點；

(3)采用權利要求1中與篩選出的有效位點相對應的引物，分別對混合檢材待檢DNA進行PCR擴增即可。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟(2)中所述擴增體系為：2×QIAGENMultiplex PCR Master Mix 5μL、Primer Mix 0.5μL、1ng/μL DNA 1μL，最后用RNase-freewater補足至10μL。

4.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟(2)中所述擴增條件為：95℃，預變性15min；94℃，變性30s；58℃，退火90s；72℃，延伸60s；最后60℃，延伸35min；共31個循環。

5.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟(3)中所述擴增體系為：2×QIAGENMultiplex PCR Master Mix 5μL、3μM引物工作液PA/PB 0.5μL、DNA 2μL，最后用RNase-free water補足至10μL。

6.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟(3)中所述擴增條件為：95℃，預變性15min；94℃，變性30s；58℃，退火90s；72℃，延伸60s；最后60℃，延伸35min；共31個循環。

7.權利要求1所述的復合體系在制備個體識別或無創產前親子鑒定試劑中的應用。

8.一種混合斑檢測用試劑盒，其特征在于，包括權利要求1所述的復合體系。