[發明專利]阪崎克羅諾桿菌干粉化雙重PCR檢測試劑盒

在審

• 申請號: 201811613279.5
• 申請日: 2018-12-27
• 公開（公告）號: CN109517914A
• 公開（公告）日: 2019-03-26
• 發明（設計）人: 周楊;蔡芷荷;萬強;吳清平;盧勉飛;滕昆侖;呂永玲
• 申請（專利權）人: 廣東環凱微生物科技有限公司;廣東環凱生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/01
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 許飛

本發明公開了阪崎克羅諾桿菌干粉化雙重PCR檢測試劑盒，該試劑盒由干粉化檢測試劑、復溶液、陽性對照干粉、陰性對照干粉、6×Loading buffer和裂解液組成。本發明通過比對篩選獲取阪崎克羅諾桿菌特異性靶基因16S rDNA和ompA的高度保守區序列，并根據該2段序列分別設計1對PCR擴增引物，同時優化測試得到有效的雙重PCR反應體系，經核酸電泳觀察結果，較傳統檢測方法更加簡便，具有檢測時間短以及特異性好等優點，適用于嬰幼兒配方食品、乳和乳制品及其原料中阪崎克羅諾桿菌的檢測。本發明采用干粉化的檢測試劑，具有較好的穩定性，使用時即溶即用，操作簡便，避免試劑損耗、污染等，并有利于產品儲存以及長途運輸，為偏遠地區的基層檢測工作提供便利。

技術領域

本發明涉及微生物分子檢測試劑，具體涉及一種干粉化的阪崎克羅諾桿菌雙重PCR檢測試劑盒。

背景技術

阪崎克羅諾桿菌(Cronobacter sakazakii)是一種革蘭氏陰性無芽孢桿菌，其具有周身鞭毛、動力以及產黃色素等特征，屬于克羅諾桿菌屬(Cronobacter)。阪崎克羅諾桿菌是常見的食源性條件致病菌，已被國際食品微生物標準化委員會(InternationalCommission on Microbiological Specifications for Foods，ICMSF)列為“嚴重危害特定人群，危害生命或慢性實質性后遺癥或長期影響”的一種致病菌，其廣泛分布于機體以及自然環境中，主要感染嬰幼兒并引發壞死性小腸結腸炎、腦膜炎以及敗血癥及等嚴重病癥，尤其是對免疫力低下、體重偏低、早產等嬰幼兒危害更大，表現出極高的后遺癥并發率和死亡率。另外，也有研究顯示，該菌還會感染老年人或免疫力低下的成年人群。

目前，對阪崎克羅諾桿菌具體致病機制以及污染源等尚不清楚，因此，加強對食品尤其是嬰幼兒配方食品、乳和乳制品及其原料中阪崎克羅諾桿菌的監測與控制至關重要。當前，對食品中阪崎克羅諾桿菌的檢測檢驗主要依據美國食藥局(FDA)推薦的相關方法，包括傳統檢測技術(如微生物分離培養鑒定、生化鑒定和血清學鑒定)、免疫學檢測技術以及實時熒光定量PCR法等。目前國內主要以微生物分離培養和形態學鑒定為主、結合生化鑒定和血清學分型鑒定等通行方法進行食品微生物學相關檢驗，其初步鑒定一般需要2～3天，而最終完成鑒定報告則需5～7天。這些方法表現出檢測周期長、操作復雜、儀器昂貴、成本高等不足，并且多局限在實驗室檢測，難以滿足在基層等地區的檢測需求。