[發(fā)明專(zhuān)利]阪崎克羅諾桿菌干粉化雙重PCR檢測(cè)試劑盒

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811613279.5
• 申請(qǐng)日: 2018-12-27
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109517914A
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-03-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 周楊;蔡芷荷;萬(wàn)強(qiáng);吳清平;盧勉飛;滕昆侖;呂永玲
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 廣東環(huán)凱微生物科技有限公司;廣東環(huán)凱生物科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/689
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/689;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/01
• 代理公司: 廣州嘉權(quán)專(zhuān)利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 44205
• 代理人: 許飛

1.用于阪崎克羅諾桿菌檢測(cè)的雙重PCR引物組，其特征在于：其序列如下：

引物對(duì)1：F1：gctaggccccggctagcatgcc和R1：cgctagctagcgtcgcattgtcc

引物對(duì)2：F2：gctagttcgctcgagcttggcc和R2：tgcgatcgtgctcgtgcccgcg。

2.一種檢測(cè)阪崎克羅諾桿菌的雙重PCR試劑盒，其特征在于：其雙重PCR引物組的序列如下：

引物對(duì)1：F1：gctaggccccggctagcatgcc和R1：cgctagctagcgtcgcattgtcc

引物對(duì)2：F2：gctagttcgctcgagcttggcc和R2：tgcgatcgtgctcgtgcccgcg。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的雙重PCR試劑盒，其特征在于：雙重PCR試劑盒包括干粉化檢測(cè)試劑和復(fù)溶液，其中：粉化檢測(cè)試劑的組成為：DNA聚合酶、dNTPs、引物和凍干保護(hù)劑。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的雙重PCR試劑盒，其特征在于：復(fù)溶液的組成為：4～16mmol/L(NH₄)₂SO₄、1～15mmol/L MgSO₄、10～25mmol/L Tris-HCl、5～18mmol/L KCl以及0.5～0.8％Triton X-100。

5.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的雙重PCR試劑盒，其特征在于：還包括裂解液，裂解液含有：5～30mmol/L Tris-HCl pH 8.5、0.5～1.5mmol/L EDTA以及0.5～1.5％SDS。

6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的雙重PCR試劑盒，其特征在于：凍干保護(hù)劑的組成為：3～6質(zhì)量份的海藻糖、0.01～0.1質(zhì)量份的甘氨酸和0.1～1質(zhì)量份的牛血清白蛋白。

7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的雙重PCR試劑盒，其特征在于：引物對(duì)1和引物對(duì)2的摩爾用量比為(0.3～1.5)：(0.1～1.2)。

8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的雙重PCR試劑盒，其特征在于：干粉化檢測(cè)試劑凍干前的組成為：0.1～0.6U/μLTaq DNA聚合酶、0.2～1.8mmol/L dNTPs、0.3～1.5μmol/L引物16S rDNA-F/16S rDNA-R、0.1～1.2μmol/L引物ompA-F/ompA-R以及凍干復(fù)合保護(hù)劑含3％～6％海藻糖(w/v)、0.01％～0.1％甘氨酸(w/v)、0.1％～1％牛血清白蛋白，余量為無(wú)菌超純水。

9.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的雙重PCR試劑盒，其特征在于：還包括陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照，其中，陽(yáng)性對(duì)照干粉為提純的阪崎克羅諾桿菌基因組DNA凍干粉，陰性對(duì)照干粉為提純的非阪崎克羅諾桿菌基因組DNA凍干粉。

10.根據(jù)權(quán)利要求3所述的雙重PCR試劑盒，其特征在于：干粉化檢測(cè)試劑的制備方法包括使用液氮預(yù)凍，之后冷凍干燥。