[發明專利]誘導質粒拷貝數增加的培養基及其應用

在審

• 申請號: 201811610822.6
• 申請日: 2018-12-27
• 公開（公告）號: CN111378609A
• 公開（公告）日: 2020-07-07
• 發明（設計）人: 趙方龍;馬艷秋;王嫚;劉凡;吳政憲
• 申請（專利權）人: 江蘇金斯瑞生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/70
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 傅婷婷;夏平

本發明提供了一種誘導質粒拷貝數增加的培養基及其應用，本發明的誘導質粒拷貝數增加的培養基相比于傳統質粒拷貝數誘導方法，質粒抽提濃度提高了45?95％，相比于不加葡萄糖與阿拉伯糖的培養基誘導方法，質粒抽提濃度提高了110?440％，該培養基在誘導質粒拷貝數增加以及實現高通量生產中起到很重要的作用。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及誘導質粒拷貝數增加的培養基及其應用。

技術背景

在基因合成領域，約有10％以上的基因序列會對宿主大腸桿菌產生毒性。這些毒性通常是由異源基因導入宿主表達的蛋白對宿主生理代謝產生了影響，進而影響宿主生長。為了抵御毒性基因，宿主大腸桿菌傾向于保留基因突變或者基因缺失的質粒，導致基因和質粒的穩定性降低。在生產中采用低拷貝的質粒能有效降低毒性基因的表達，同時提高宿主的生長活力和基因的穩定性。但是，低拷貝質粒產率較低，抽提較為困難，影響生產效率。為了解決這一問題，在質粒抽提前，需要將低拷貝質粒快速誘導至高拷貝可提高質粒產率。而現有誘導質粒拷貝數增加的方法需要轉接、OD600定量及誘導劑添加等多步操作，較為復雜，難以滿足實際高通量生產。

發明內容

本發明針對現有質粒拷貝數誘導系統操作繁瑣的問題，提供了一種誘導質粒拷貝數增加的培養基及其應用，在簡化操作的同時提高了生產效率。

本發明一方面提供了一種誘導質粒拷貝數增加的培養基，其特征在于，所述培養基包含胰蛋白胨、酵母提取物、葡萄糖、氯化鈉和阿拉伯糖。

在一些實施方案中，所述葡萄糖的濃度為0.1-10g/L，優選為1-5g/L，更優選為0.5-2g/L。

在一些實施方案中，所述葡萄糖的濃度為0.1-10g/L。在一些實施方案中，所述葡萄糖的濃度為1-5g/L。在一些實施方案中，所述葡萄糖的濃度為0.5-2g/L。在一些實施方案中，所述葡萄糖的濃度為0.5g/L、0.6g/L、0.7g/L、0.8g/L、0.9g/L、1g/L、1.1g/L、1.2g/L、1.3g/L、1.4g/L、1.5g/L、1.6g/L、1.7g/L、1.8g/L、1.9g/L、2g/L。在一些實施方案中，所述葡萄糖的濃度為0.5g/L。在一些實施方案中，所述葡萄糖的濃度為1g/L。在一些實施方案中，所述葡萄糖的濃度為2g/L。在一些實施方案中，所述葡萄糖的濃度為10g/L。

在另一些實施方案中，所述阿拉伯糖的濃度為0.1-10g/L，優選為1-5g/L，更優選為0.3-5g/L。

在另一些實施方案中，所述阿拉伯糖的濃度為0.1-10g/L。在一些實施方案中，所述阿拉伯糖的濃度為1-5g/L。在一些實施方案中，所述阿拉伯糖的濃度為0.3-0.75g/L。在一些實施方案中，所述阿拉伯糖的濃度為0.3g/L、0.35g/L、0.4g/L、0.45g/L、0.5g/L、0.55g/L、0.6g/L、0.65g/L、0.7g/L、0.75g/L。在一些實施方案中，所述阿拉伯糖的濃度為0.3g/L。在一些實施方案中，所述阿拉伯糖的濃度為0.6g/L。在一些實施方案中，所述阿拉伯糖的濃度為0.75g/L。在一些實施方案中，所述阿拉伯糖的濃度為1g/L。在一些實施方案中，所述阿拉伯糖的濃度為2g/L。在一些實施方案中，所述阿拉伯糖的濃度為5g/L。

在又一些實施方案中，所述胰蛋白胨的濃度為1-15g/L。

在又一些優選實施方案中，所述胰蛋白胨的濃度為5-10g/L。

在又一些實施方案中，所述酵母提取物的濃度為1-15g/L。

在又一些優選實施方案中，所述酵母提取物的濃度為5-10g/L。

在又一些實施方案中，所述氯化鈉的濃度為1-15g/L。

在又一些優選實施方案中，所述氯化鈉的濃度為5-10g/L。