[發(fā)明專利]鑒定皂莢性別的基因組合、SSR引物組合、鑒定方法和應(yīng)用有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201811609308.0 | 申請日： | 2018-12-27 |
| 公開（公告）號： | CN109457023B | 公開（公告）日： | 2021-07-13 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 李建軍;葉承霖 | 申請（專利權(quán)）人： | 河南師范大學(xué) |
| 主分類號： | C12Q1/6879 | 分類號： | C12Q1/6879;C12Q1/6895;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京高沃律師事務(wù)所 11569 | 代理人： | 代芳 |
| 地址： | 453000 河*** | 國省代碼： | 河南;41 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 鑒定 皂莢 性別 基因 組合 ssr 引物 方法 應(yīng)用 | ||
1.鑒定皂莢性別的基因組合的SSR引物組合，其特征在于，所述SSR引物組合包括：GS-SSR-F1引物、GS-SSR-R1引物、GS-SSR-F2引物、GS-SSR-R2引物、GS-SSR-F3引物、GS-SSR-R3引物、GS-SSR-F4引物、GS-SSR-R4引物、GS-SSR-F5引物和GS-SSR-R5引物；
所述基因組合包括G1基因、G2基因、G3基因、G4基因和G5基因；
所述GS-SSR-F1引物為SEQ ID No.6所示的核苷酸序列，所述GS-SSR-R1引物為SEQ IDNo.7所示的核苷酸序列，所述GS-SSR-F1引物和GS-SSR-R1引物擴(kuò)增G1基因；
所述GS-SSR-F2引物為SEQ ID No.8所示的核苷酸序列，所述GS-SSR-R2引物為SEQ IDNo.9所示的核苷酸序列，所述GS-SSR-F2引物和GS-SSR-R2引物擴(kuò)增G2基因；
所述GS-SSR-F3引物為SEQ ID No.10所示的核苷酸序列，所述GS-SSR-R3引物為SEQ IDNo.11所示的核苷酸序列，所述GS-SSR-F3引物和GS-SSR-R3引物擴(kuò)增G3基因；
所述GS-SSR-F4引物為SEQ ID No .12所示的核苷酸序列，所述GS-SSR-R4引物為SEQID No.13所示的核苷酸序列，所述GS-SSR-F4引物和GS-SSR-R4引物擴(kuò)增G4基因；
所述GS-SSR-F5引物為SEQ ID No.14所示的核苷酸序列，所述GS-SSR-R5引物為SEQ IDNo.15所示的核苷酸序列，所述GS-SSR-F5引物和GS-SSR-R5引物擴(kuò)增G5基因。
2.利用權(quán)利要求1所述的SSR引物組合鑒定皂莢性別的方法，其特征在于，包括：
以皂莢基因組DNA為模版，用所述SSR引物分別進(jìn)行PCR擴(kuò)增，分別得到擴(kuò)增產(chǎn)物；當(dāng)所述擴(kuò)增產(chǎn)物的分子量同時(shí)分別為186bp、305bp、266bp、150bp和260bp時(shí)，皂莢為雌性，否則為雄性。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述皂莢為皂莢葉。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述PCR擴(kuò)增的體系每25μL包括：濃度為150ng/μL的基因組DNA 1μL，dNTP 2μL，濃度為10μM/L的GS-SSR-F 1μL，濃度為10μM/L的GS-SSR-R 1μL，10×buffer 2.5μL，Taq酶0.5μL，濃度為2.5mM/mL的氯化鎂溶液1.5μL和ddH2O15.5μL。
5.根據(jù)權(quán)利要求2或4所述的方法，其特征在于，所述PCR擴(kuò)增的程序包括：95℃ 5min；95 ℃ 30s ，52 ℃ 30s，72 ℃ 30s ，35個(gè)循環(huán)；72 ℃ 7min 。
6.權(quán)利要求1所述的SSR引物組合在鑒定皂莢性別中的應(yīng)用。
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