[發明專利]鑒定皂莢性別的基因組合、SSR引物組合、鑒定方法和應用

有效

• 申請號: 201811609308.0
• 申請日: 2018-12-27
• 公開（公告）號: CN109457023B
• 公開（公告）日: 2021-07-13
• 發明（設計）人: 李建軍;葉承霖
• 申請（專利權）人: 河南師范大學
• 主分類號: C12Q1/6879
• 分類號: C12Q1/6879;C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 代芳

1.鑒定皂莢性別的基因組合的SSR引物組合，其特征在于，所述SSR引物組合包括：GS-SSR-F1引物、GS-SSR-R1引物、GS-SSR-F2引物、GS-SSR-R2引物、GS-SSR-F3引物、GS-SSR-R3引物、GS-SSR-F4引物、GS-SSR-R4引物、GS-SSR-F5引物和GS-SSR-R5引物；

所述基因組合包括G1基因、G2基因、G3基因、G4基因和G5基因；

所述GS-SSR-F1引物為SEQ ID No.6所示的核苷酸序列，所述GS-SSR-R1引物為SEQ IDNo.7所示的核苷酸序列，所述GS-SSR-F1引物和GS-SSR-R1引物擴增G1基因；

所述GS-SSR-F2引物為SEQ ID No.8所示的核苷酸序列，所述GS-SSR-R2引物為SEQ IDNo.9所示的核苷酸序列，所述GS-SSR-F2引物和GS-SSR-R2引物擴增G2基因；

所述GS-SSR-F3引物為SEQ ID No.10所示的核苷酸序列，所述GS-SSR-R3引物為SEQ IDNo.11所示的核苷酸序列，所述GS-SSR-F3引物和GS-SSR-R3引物擴增G3基因；

所述GS-SSR-F4引物為SEQ ID No .12所示的核苷酸序列，所述GS-SSR-R4引物為SEQID No.13所示的核苷酸序列，所述GS-SSR-F4引物和GS-SSR-R4引物擴增G4基因；

所述GS-SSR-F5引物為SEQ ID No.14所示的核苷酸序列，所述GS-SSR-R5引物為SEQ IDNo.15所示的核苷酸序列，所述GS-SSR-F5引物和GS-SSR-R5引物擴增G5基因。

2.利用權利要求1所述的SSR引物組合鑒定皂莢性別的方法，其特征在于，包括：

以皂莢基因組DNA為模版，用所述SSR引物分別進行PCR擴增，分別得到擴增產物；當所述擴增產物的分子量同時分別為186bp、305bp、266bp、150bp和260bp時，皂莢為雌性，否則為雄性。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述皂莢為皂莢葉。

4.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述PCR擴增的體系每25μL包括：濃度為150ng/μL的基因組DNA 1μL，dNTP 2μL，濃度為10μM/L的GS-SSR-F 1μL，濃度為10μM/L的GS-SSR-R 1μL，10×buffer 2.5μL，Taq酶0.5μL，濃度為2.5mM/mL的氯化鎂溶液1.5μL和ddH₂O15.5μL。

5.根據權利要求2或4所述的方法，其特征在于，所述PCR擴增的程序包括：95℃ 5min；95 ℃ 30s ，52 ℃ 30s，72 ℃ 30s ，35個循環；72 ℃ 7min 。

6.權利要求1所述的SSR引物組合在鑒定皂莢性別中的應用。