[發(fā)明專利]鑒定皂莢性別的基因組合、SSR引物組合、鑒定方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811609308.0
• 申請(qǐng)日: 2018-12-27
• 公開（公告）號(hào): CN109457023B
• 公開（公告）日: 2021-07-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李建軍;葉承霖
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 河南師范大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/6879
• 分類號(hào): C12Q1/6879;C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 北京高沃律師事務(wù)所 11569
• 代理人: 代芳

本發(fā)明提供了鑒定皂莢性別的基因組合、SSR引物組合、鑒定方法和應(yīng)用，涉及分子生物學(xué)DNA分子標(biāo)記檢測(cè)，所述基因組合包括G1基因、G2基因、G3基因、G4基因和G5基因；所述G1～5基因依次具有SEQ ID No.1～5所示的核苷酸序列。采用本發(fā)明提供的基因組合能夠鑒定皂莢的性別，準(zhǔn)確率為100％。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分子生物學(xué)DNA分子標(biāo)記檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及鑒定皂莢性別的基因組合、SSR引物組合、鑒定方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

皂莢Gleditsia sinensis Lam.系豆科蘇木亞科皂莢屬植物(2n＝28)，為我國(guó)重要的鄉(xiāng)土樹種之一。皂莢可以用于環(huán)境防護(hù)、園林綠化，還能作為經(jīng)濟(jì)樹種和木料使用。不僅如此，皂莢具有很高的藥用價(jià)值，中國(guó)藥典收錄皂角(大皂莢與豬牙皂)與皂角刺為皂莢藥用部位；皂角刺所含黃酮類、甾類等藥用成分在治療腫瘤方面發(fā)揮著重要作用；大皂角中所含的皂甙除了抗癌、抗病毒等功效還具有有去污和發(fā)泡的能力，已經(jīng)成為天然的化妝和洗滌用品的制作原料，具有很高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。

SSR(Simple Sequence Repeats)標(biāo)記是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一種以特異引物PCR為基礎(chǔ)的分子標(biāo)記技術(shù)，也稱為微衛(wèi)星DNA(MicrosatelliteDNA)，是一類由幾個(gè)核苷酸(一般為1～6個(gè))為重復(fù)單位組成的長(zhǎng)達(dá)幾十個(gè)核苷酸的串聯(lián)重復(fù)序列。每個(gè)SSR兩側(cè)的序列一般是相對(duì)保守的單拷貝序列。與其它分子標(biāo)記相比，SSR標(biāo)記具有以下優(yōu)點(diǎn)：(1)數(shù)量豐富，覆蓋整個(gè)基因組，揭示的多態(tài)性高；(2)具有多等位基因的特性，提供的信息量高；(3)以孟德爾方式遺傳，呈共顯性；(4)每個(gè)位點(diǎn)由設(shè)計(jì)的引物順序決定，便于不同的實(shí)驗(yàn)室相互交流合作開發(fā)引物。SSR分子標(biāo)記電泳結(jié)果分辨率高，穩(wěn)定性妤，易于測(cè)序，被廣泛使用于遺傳多樣性分析等分子生物學(xué)領(lǐng)域，但現(xiàn)有技術(shù)并未有關(guān)于SSR分子標(biāo)記應(yīng)用于植物性別鑒別研究的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供鑒定皂莢性別的基因組合、SSR引物組合、鑒定方法和應(yīng)用，采用本發(fā)明提供的基因組合能夠鑒定皂莢的性別。

本發(fā)明提供了鑒定皂莢性別的基因組合，所述基因組合包括G1基因、G2基因、G3基因、G4基因和G5基因；

所述G1～5基因依次具有SEQ ID No.1～5所示的核苷酸序列。

本發(fā)明還提供了擴(kuò)增上述技術(shù)方案所述基因組合的SSR引物組合，所述SSR標(biāo)記引物組合包括：GS-SSR-F1引物、GS-SSR-R1引物、GS-SSR-F2引物、GS-SSR-R2引物、GS-SSR-F3引物、GS-SSR-R3引物、GS-SSR-F4引物、GS-SSR-R4引物、GS-SSR-F5引物和GS-SSR-R5引物；

所述GS-SSR-F1引物具有SEQ ID No.6所示的核苷酸序列，所述GS-SSR-R1引物具有SEQ ID No.7所示的核苷酸序列，所述GS-SSR-F1引物和GS-SSR-R1引物擴(kuò)增G1基因；

所述GS-SSR-F2引物具有SEQ ID No.8所示的核苷酸序列，所述GS-SSR-R2引物具有SEQ ID No.9所示的核苷酸序列，所述GS-SSR-F2引物和GS-SSR-R2引物擴(kuò)增G2基因；

所述GS-SSR-F3引物具有SEQ ID No.10所示的核苷酸序列，所述GS-SSR-R3引物具有SEQ ID No.11所示的核苷酸序列，所述GS-SSR-F3引物和GS-SSR-R3引物擴(kuò)增G3基因；

所述GS-SSR-F4引物具有SEQ ID No.12所示的核苷酸序列，所述GS-SSR-R4引物具有SEQ ID No.13所示的核苷酸序列，所述GS-SSR-F4引物和GS-SSR-R4引物擴(kuò)增G4基因；