[發明專利]一種檢測ATP的比色方法及試劑盒

有效

• 申請號: 201811609093.2
• 申請日: 2018-12-27
• 公開（公告）號: CN109632780B
• 公開（公告）日: 2021-04-06
• 發明（設計）人: 栗瑞敏;鄧毛程;劉如運;陳維新;黃星源;李靜
• 申請（專利權）人: 廣東輕工職業技術學院
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78;G01N21/31;G01N21/01
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 蘇運貞

本發明公開了一種檢測ATP的比色方法及試劑盒。該比色方法通過將已知濃度的ATP溶液和待測溶液分別與H₂O₂、顯色劑和含氫離子的小分子溶液混合，反應；依據已知濃度的反應產物的顏色，判斷待測溶液反應產物中是否含有ATP；以及將已知濃度的反應產物和待測溶液反應產物在相同波長下檢測，將已知濃度的反應產物的檢測值制作標準曲線，依據標準曲線和待測溶液反應產物的檢測值，得到待測溶液中的ATP的濃度。依據該比色方法，本發明還提供了一種檢測ATP的試劑盒，包括H₂O₂檢測液、顯色劑檢測液、含氫離子的小分子檢測液和ATP標準溶液。本發明提供的方法簡單、便宜、快速、且靈敏。

技術領域

本發明涉及檢測技術領域，特別涉及一種檢測ATP的比色方法及試劑盒。

背景技術

ATP(adenosine triphosphate)，中文為腺嘌呤核苷三磷酸(簡稱三磷酸腺苷)，是一種不穩定的高能化合物，由1分子腺嘌呤，1分子核糖和3分子磷酸組成。ATP在生物體內發揮著重要的作用，是所有生物體生存和細胞繁殖的能量來源。研究發現，ATP可以作為細胞存活率和細胞損傷的指示劑，其在生物體細胞中的濃度與腫瘤、心血管疾病、帕金森綜合征等重大疾病有關。目前，ATP的檢測還被普遍用于微生物的快速檢測、疾病的診斷與預防、食品分析等領域。

檢測ATP的方法有主要包括高效液相色譜法、核酸適配體法、熒光素/熒光素酶法以及電泳法等。這些方法的靈敏度和特異性都很好，但是需要昂貴的儀器和繁瑣的操作步驟，并且耗時耗力。因此，研究一種簡單快速檢測ATP的方法具有重要的意義。

發明內容

本發明的首要目的在于克服現有技術的缺點與不足，提供一種檢測ATP的比色方法。

本發明的另一目的在于提供一種檢測ATP的試劑盒。

本發明的目的通過下述技術方案實現：一種檢測ATP的比色方法，包括如下步驟：

(1)將若干個不同濃度的ATP溶液與H₂O₂、顯色劑和含氫離子的小分子溶液混合，得到反應體系I，反應，得到已知濃度的反應產物；將待測溶液的原液或稀釋液與H₂O₂、顯色劑和含氫離子的小分子溶液混合，得到反應體系II，反應，得到待測溶液反應產物；

(2)依據已知濃度的反應產物的顏色，判斷待測溶液反應產物中是否含有ATP，判斷標準如下：若待測溶液反應產物的顏色與ATP為0的已知濃度的反應產物的顏色相當時，表示待測溶液不含ATP；若待測溶液反應產物的顏色比ATP為0的已知濃度的反應產物的顏色淺時，表示待測溶液中含有ATP；

(3)將步驟(1)得到已知濃度的反應產物和待測溶液反應產物在相同波長下檢測；將已知濃度的反應產物的檢測值制作標準曲線，依據標準曲線和待測溶液反應產物的檢測值，得到待測溶液中的ATP的濃度。

步驟(1)中：

所述的反應體系I中的ATP的濃度優選為0～200μM；更優選為0μM以及0.01～50μM。

所述的含氫離子的小分子為酸；優選為鹽酸、硫酸、磷酸、硝酸、氫氟酸、氫溴酸、氫碘酸、氯酸、高氯酸、次氯酸、亞硫酸、檸檬酸、草酸、甲酸、丙酸和丁酸中的一種或至少兩種。

所述的顯色劑指的是可以被過氧化氫氧化的有機試劑；優選為3,3,5,5-四甲基聯苯胺(TMB)、2,2-聯氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二銨鹽(ABTS)和鄰苯二胺中的一種或至少兩種。

所述的含氫離子的小分子的濃度，以氫離子的含量計算濃度，為1μM～10M；優選1M、0.5M、0.1M、0.05M、0.01M、0.005M、0.001M、500μM、50μM、1μM。