[發明專利]一種檢測ATP的比色方法及試劑盒

有效

• 申請號: 201811609093.2
• 申請日: 2018-12-27
• 公開（公告）號: CN109632780B
• 公開（公告）日: 2021-04-06
• 發明（設計）人: 栗瑞敏;鄧毛程;劉如運;陳維新;黃星源;李靜
• 申請（專利權）人: 廣東輕工職業技術學院
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78;G01N21/31;G01N21/01
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 蘇運貞

1.一種檢測ATP的比色方法，其特征在于包括如下步驟：

（1）將若干個不同濃度的ATP溶液與H₂O₂、顯色劑和含氫離子的小分子溶液混合，得到反應體系I，反應，得到已知濃度的反應產物；將待測溶液的原液或稀釋液與H₂O₂、顯色劑和含氫離子的小分子溶液混合，得到反應體系II，反應，得到待測溶液反應產物；

（2）依據已知濃度的反應產物的顏色，判斷待測溶液反應產物中是否含有ATP，判斷標準如下：若待測溶液反應產物的顏色與ATP為0的已知濃度的反應產物的顏色相當時，表示待測溶液不含ATP；若待測溶液反應產物的顏色比ATP為0的已知濃度的反應產物的顏色淺時，表示待測溶液中含有ATP；

（3）將步驟（1）得到已知濃度的反應產物和待測溶液反應產物在相同波長下檢測；將已知濃度的反應產物的檢測值制作標準曲線，依據標準曲線和待測溶液反應產物的檢測值，得到待測溶液中的ATP的濃度。

2.根據權利要求1所述的檢測ATP的比色方法，其特征在于：步驟（1）中所述的反應體系I中ATP的濃度為0～200μM。

3.根據權利要求1所述的檢測ATP的比色方法，其特征在于：

步驟（1）中所述的含氫離子的小分子為酸；

步驟（1）中所述的顯色劑指的是能被過氧化氫氧化的有機試劑。

4.根據權利要求3所述的檢測ATP的比色方法，其特征在于：

所述的含氫離子的小分子為鹽酸、硫酸、磷酸、硝酸、氫氟酸、氫溴酸、氫碘酸、氯酸、高氯酸、次氯酸、亞硫酸、檸檬酸、草酸、甲酸、丙酸和丁酸中的一種或至少兩種；

所述的顯色劑為3,3,5,5-四甲基聯苯胺、2 ,2-聯氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二銨鹽和鄰苯二胺中的一種或至少兩種。

5.根據權利要求1所述的檢測ATP的比色方法，其特征在于：

步驟（1）中所述的含氫離子的小分子的濃度，以氫離子的含量計算濃度，為1μM～10M；

步驟（1）中所述的顯色劑的濃度為0.001mM～50 mM；

步驟（1）中所述的H₂O₂的濃度為0.001mM～1000 mM；

步驟（1）中所述的反應的溫度為0～100℃；

步驟（1）中所述的反應的時間為1min～24h。

6.根據權利要求5所述的檢測ATP的比色方法，其特征在于：

所述的含氫離子的小分子的濃度為1M、0.5M、0.1M、0.05M、0.01M、0.005M、0.001M、500μM、50 μM或1μM；

所述的顯色劑的濃度為0.001 mM、0.01 mM、0.1 mM、1 mM、10 mM或50 mM；

所述的H₂O₂的濃度為0.001 mM、0.01 mM、0.1 mM、1 mM、10 mM、50 mM、100 mM、500mM或1000 mM；

所述的反應的溫度為室溫；

所述的反應的時間為1min～24h。

7.根據權利要求1所述的檢測ATP的比色方法，其特征在于：

步驟（3）中所述的波長為400～450nm。

8.根據權利要求7所述的檢測ATP的比色方法，其特征在于：

所述的波長為420nm。

9.一種檢測ATP的試劑盒，其特征在于：是基于權利要求1～8任一項所述的比色方法設計得到，包括以下成分：H₂O₂檢測液、顯色劑檢測液、含氫離子的小分子檢測液和ATP標準溶液。