[發明專利]一種混合益生菌發酵劑的同步制備工藝及其飼料應用

在審

• 申請號: 201811605370.2
• 申請日: 2018-12-26
• 公開（公告）號: CN109486724A
• 公開（公告）日: 2019-03-19
• 發明（設計）人: 孔繁玲;周天策;劉晶
• 申請（專利權）人: 江蘇牧之歌生態農業科技有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/16;C12N13/00;A23K10/12;A23K50/75;C12R1/74;C12R1/085;C12R1/25
• 代理公司: 長沙新裕知識產權代理有限公司 43210
• 代理人: 趙登高

1.一種混合益生菌發酵劑的同步制備工藝及其飼料應用，其特征在于，該制備工藝的步驟包括：

（1）制備熱帶假絲酵母、蠟樣芽孢桿菌、植物乳桿菌的種子液

熱帶假絲酵母：熱帶假絲酵母菌種經PDA斜面活化后，接種至YPD液體培養基中，在搖床上于30℃、180r/min振蕩培養24h；蠟樣芽孢桿菌：蠟樣芽孢桿菌經PDA斜面活化后，接種至LB液體培養基中，在搖床上于35℃、180r/min振蕩培養12h；植物乳桿菌：植物乳桿菌經MRS斜面（含2%瓊脂）活化后，接種至MRS液體培養基中，在培養箱中于37℃靜置培養12h；

（2）種子液的磁場刺激處理

將制備好的種子液放入磁場處理器中，調節磁感應強度為0.8mT，處理15min后置于步驟（1）所述的對應培養條件下繼續培養12h，再放入磁場處理器中處理15nin，然后可進行接種；

（3）連續補料發酵

將處理后的熱帶假絲酵母和蠟樣芽孢桿菌種子液接入發酵培養基中，發酵參數為溫度32~34℃，轉速190~210r/min，通氣比1.1~1.3，培養22~26h后停止攪拌和通氣，接入處理后的植物乳桿菌種子液繼續培養22~26h；當開始培養8h后，按照一定的速率流加補料培養基；

（4）制備混合益生菌發酵劑

發酵結束后，將發酵液以5000r/min的轉速離心10min，收集菌體冷凍干燥，即得混合益生菌發酵劑。

2.根據權利要求1所述的一種混合益生菌發酵劑的同步制備工藝及其飼料應用，其特征在于，所述步驟（3）中熱帶假絲酵母、蠟樣芽孢桿菌、植物乳桿菌種子液的接種比例為3:4:3，總接種量為8~12%。

3.根據權利要求1所述的一種混合益生菌發酵劑的同步制備工藝及其飼料應用，其特征在于，所述步驟（3）中發酵培養基的成分為：甘蔗糖蜜16~20g/L，玉米淀粉8~10g/L，豆粕粉13~15g/L，尿素10~13g/L，甘露寡糖2.0~2.8 g/L，醋酸鈉3.6~4.0g/L，K₂HPO₄ 1.7~2.1g/L，KH₂PO₄ 0.2~0.4g/L，MgSO₄·7H₂O0.7~0.8g/L，FeSO₄·7H₂O 0.01~0.02g/L，CaCl₂ 0.1~0.2g/L，檸檬酸鋅0.03~0.05g/L，茉莉酸甲酯40~50μmol/L，桑葉提取物2.7~3.5g/L，司盤-60 7.5~8.3g/L，余量為水，初始pH值為6.0~7.0。

4.根據權利要求1所述的一種混合益生菌發酵劑的同步制備工藝及其飼料應用，其特征在于，步驟（3）所述發酵培養基的裝液量為35~45%，優選為40%。

5.根據權利要求1所述的一種混合益生菌發酵劑的同步制備工藝及其飼料應用，其特征在于，所述步驟（3）中補料培養基的成分為：甘蔗糖蜜5~7g/L，玉米淀粉3~4g/L，豆粕粉3.3~3.5g/L，尿素3.8~4.2g/L，甘露寡糖1.0~1.4g/L，余量為水，初始pH值為6.0~7.0。

6.根據權利要求1所述的一種混合益生菌發酵劑的同步制備工藝及其飼料應用，其特征在于，所述步驟（3）中補料培養基的流加速率為每小時流加發酵培養基體積的2.0~3.0%，優選為2.5%。

7.根據權利要求1所述的一種混合益生菌發酵劑的同步制備工藝及其飼料應用，其特征在于，所述飼料應用是指在雞飼料發酵上的應用。