[發明專利]一種包蟲重組蛋白及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 201811604101.4
• 申請日: 2018-12-26
• 公開（公告）號: CN109485725A
• 公開（公告）日: 2019-03-19
• 發明（設計）人: 李曉光;劉毅
• 申請（專利權）人: 杭州億米諾生物科技有限公司
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;C07K1/22;C07K1/18;C07K1/16;C12N15/13;C12N15/70;G01N33/68
• 代理公司: 杭州信義達專利代理事務所(普通合伙) 33305
• 代理人: 施建勇

本發明公開了一種包蟲重組蛋白及其制備方法和應用，涉及生物醫藥技術領域，包括包蟲抗原和包蟲單鏈抗體；所述包蟲抗原為含有主要抗原決定簇的AgB8/2抗原；所述包蟲單鏈抗體為scFv，包括以下步驟:(1)查找包蟲中含有主要抗原決定簇的AgB8/2抗原；(2)優化包蟲AgB8/2抗原基因的密碼子，合成核酸序列并進行表達；(3)構建針對包蟲AgB8/1抗原的單鏈抗體，調取單鏈抗體scFv的基因；(4)重組優化的包蟲AgB8/2抗原基因和針對包蟲AgB8/1抗原的單鏈抗體scFv的基因，并進行表達；(5)純化及復性包蟲重組蛋白。本發明在開發單克隆抗體的基礎上又進行重組抗體技術開發單鏈抗體，易于在細胞中表達，可以在真核或者原核細胞中表達，可大量生產，成本較低。

技術領域

本發明涉及生物醫藥技術領域，特別涉及一種包蟲重組蛋白及其 制備方法和應用。

背景技術

包蟲病分為囊性包蟲病和泡型包蟲病,其中70％的泡型包蟲病患 者在5年內死亡,10年內的死亡率高達92％。因其高感染率和高致死 率,包蟲病又有“蟲癌”之稱。凈水工程和犬類管理被視為切斷蟲卵 源頭的關鍵。

包蟲病是人感染棘球絳蟲的幼蟲(棘球蚴)所致的慢性寄生蟲病。 本病的臨床表現視包蟲囊部位、大小和有無并發癥而不同。長期以來, 包蟲病被認為是一種人畜共患寄生蟲病,稱之為動物源性疾病。根據 近年來流行病學調查,稱之地方性寄生蟲??；在流行區帶有職業性損 害的特點,被列為某些人群的職業病；從全球范圍講包蟲病為少數民 族或宗教部落所特有的一種常見病和多發病。

體外診斷核心原料的開發是開發相應診斷試劑的前提，只有開發 出具有高活性、高性能的抗原抗體，體外診斷試劑產品才能成為現實。 因此，針對包蟲抗體和抗原開發出能夠用以生產診斷試劑的原料迫在 眉睫，從某種程度上說，原料的開發也必將成為降低包蟲病蔓延的首 要解決問題。

發明內容

本發明的目的在于，提供一種包蟲重組蛋白及其制備方法和應 用。

本發明的技術方案:一種包蟲重組蛋白，包括包蟲抗原和包蟲單 鏈抗體；

所述包蟲抗原為含有主要抗原決定簇的AgB8/2抗原；

所述包蟲單鏈抗體為scFv。

一種包蟲重組蛋白的制備方法，包括以下步驟:

(1)查找包蟲中含有主要抗原決定簇的AgB8/2抗原；

(2)優化包蟲AgB8/2抗原基因的密碼子，合成核酸序列并進行 表達；

(3)構建針對包蟲AgB8/1抗原的單鏈抗體，調取單鏈抗體scFv 的基因；

(4)重組優化的包蟲AgB8/2抗原基因和針對包蟲AgB8/1抗原 的單鏈抗體scFv的基因，并進行表達；

(5)純化及復性包蟲重組蛋白。

本發明的表達系統為大腸桿菌表達系統，它具有周期短，費用低， 表達量大等特點。

為了使得重組蛋白更好地保持活性位點，本發明選擇比較溫和的 培養和誘導條件，其表達時的誘導溫度為20℃、25℃、28℃、37℃， 進一步優選的誘導溫度為25℃、37℃，更進一步優選的誘導溫度為 25℃。誘導轉速為250rpm，誘導的IPTG(異丙基-β-D-硫代半乳糖 苷)濃度為0.1mM。這樣使得重組蛋白有了更加緩慢的表達，有充分 的時間進行空間構象的形成。

本發明采用超聲的方式破碎細菌。在破碎菌體的時候，為了避免 劇烈條件，將破碎條件定為200w，每次超聲6s，間隔3s超聲一次， 共180次。

本發明重組蛋白的純化方式有離子交換層析，凝膠過濾層析和親 和層析等方法，進一步優選為親和層析。