[發明專利]一種包蟲重組蛋白及其制備方法和應用在審
| 申請號： | 201811604101.4 | 申請日： | 2018-12-26 |
| 公開（公告）號： | CN109485725A | 公開（公告）日： | 2019-03-19 |
| 發明（設計）人： | 李曉光;劉毅 | 申請（專利權）人： | 杭州億米諾生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C07K16/18 | 分類號： | C07K16/18;C07K1/22;C07K1/18;C07K1/16;C12N15/13;C12N15/70;G01N33/68 |
| 代理公司： | 杭州信義達專利代理事務所(普通合伙) 33305 | 代理人： | 施建勇 |
| 地址： | 310000 浙江省杭州*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 單鏈抗體 抗原 重組蛋白 制備方法和應用 抗原決定簇 抗原基因 合成核酸序列 生物醫藥技術 單克隆抗體 技術開發 原核細胞 重組抗體 基因 密碼子 調取 復性 構建 真核 優化 查找 細胞 開發 | ||
1.一種包蟲重組蛋白，其特征在于:包括包蟲抗原和包蟲單鏈抗體；
所述包蟲抗原為含有主要抗原決定簇的AgB8/2抗原；
所述包蟲單鏈抗體為scFv。
2.一種基于權利要求1所述的一種包蟲重組蛋白的制備方法，其特征在于:包括以下步驟:
(1)查找包蟲中含有主要抗原決定簇的AgB8/2抗原；
(2)優化包蟲AgB8/2抗原基因的密碼子，合成核酸序列并進行表達；
(3)構建針對包蟲AgB8/1抗原的單鏈抗體，調取單鏈抗體scFv的基因；
(4)重組優化的包蟲AgB8/2抗原基因和針對包蟲AgB8/1抗原的單鏈抗體scFv的基因，并進行表達；
(5)純化及復性包蟲重組蛋白。
3.根據權利要求2所述的一種包蟲重組蛋白的制備方法，其特征在于:所述步驟(2)和步驟(4)在大腸桿菌系統中表達。
4.根據權利要求3所述的一種包蟲重組蛋白的制備方法，其特征在于:所述步驟(2)和步驟(4)表達時的誘導溫度為20℃、25℃、28℃或37℃，誘導轉速為250rpm，誘導的IPTG濃度為0.1mM。
5.根據權利要求3所述的一種包蟲重組蛋白的制備方法，其特征在于:所述誘導溫度為25℃或37℃。
6.根據權利要求3所述的一種包蟲重組蛋白的制備方法，其特征在于:所述誘導溫度為25℃。
7.根據權利要求2所述的一種包蟲重組蛋白的制備方法，其特征在于:所述步驟(5)的純化方式選自離子交換層析、凝膠過濾層析或親和層析。
8.根據權利要求2所述的一種包蟲重組蛋白及其制備方法，其特征在于:所述步驟(5)的純化方式為親和層析。
9.一種基于權利要求1所述的一種包蟲重組蛋白的應用，其特征在于：所述重組蛋白用于制備包蟲檢測試劑盒。
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