[發明專利]一種基于SCoT標記的PCR擴增產物的分離方法在審
| 申請號： | 201811602186.2 | 申請日： | 2018-12-26 |
| 公開（公告）號： | CN109609494A | 公開（公告）日： | 2019-04-12 |
| 發明（設計）人： | 史衛東;羅海玲;康紅衛;熊發前;韋愛培 | 申請（專利權）人： | 廣西壯族自治區農業科學院 |
| 主分類號： | C12N15/10 | 分類號： | C12N15/10;C12Q1/6806 |
| 代理公司： | 北京高沃律師事務所 11569 | 代理人： | 代芳 |
| 地址： | 530000 廣西*** | 國省代碼： | 廣西;45 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳 差異片段 條帶 瓊脂糖凝膠電泳 基因工程技術 清晰 | ||
1.一種基于SCoT標記的PCR擴增產物的分離方法，其特征在于，采用非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分離SCoT標記的PCR擴增產物。
2.根據權利要求1所述的分離方法，其特征在于，所述非變性聚丙烯酰胺凝膠的原料為：Acr溶液、Bis溶液、10XTBE和ddH2O；
所述Acr溶液與Bis溶液、10XTBE、ddH2O的體積比為24:12.84:12:70.8；
所述Acr溶液的質量濃度為40％；
所述Bis溶液的質量濃度為2％；
所述10XTBE的pH值為8.3。
3.根據權利要求1所述的分離方法，其特征在于，所述電泳的條件包括：所述電泳的電壓功率為120w，所述電泳的時間為5h。
4.權利要求1～3任一項所述的分離方法在獲取感蟲菜心和抗蟲菜心基因間差異片段中的應用。
5.根據權利要求4所述的應用，其特征在于，所述獲取感蟲菜心和抗蟲菜心基因間差異片段使用的SCoT引物如SEQ ID No.1～20所示。
6.根據權利要求4所述的應用，其特征在于，所述獲取感蟲菜心和抗蟲菜心基因間差異片段使用的PCR體系含有氯化鎂、SCoT引物、dNTPs、taq DNA聚合酶和基因組DNA；
所述PCR體系中氯化鎂的濃度為1.5mmol/L；
所述PCR體系中SCoT引物的濃度為0.5μmol/L；
所述PCR體系中dNTPs的濃度為0.5mmol/L；
所述PCR體系中taq DNA聚合酶活性為1.25U/20μL；
所述PCR體系中基因組DNA的含量為50ng/20μL。
7.根據權利要求6所述的應用，其特征在于，所述PCR體系擴增的程序包括：94℃4min；94℃30s，50℃60s，72℃1.5min，共35個循環；72℃5min。
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