[發明專利]用于檢測艱難梭菌基因的引物組合物、試劑盒及試劑盒的應用

在審

• 申請號: 201811600801.6
• 申請日: 2018-12-26
• 公開（公告）號: CN109439781A
• 公開（公告）日: 2019-03-08
• 發明（設計）人: 蔣健暉;王海波;唐麗娟
• 申請（專利權）人: 湖南融健基因生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/145
• 代理公司: 湖南兆弘專利事務所(普通合伙) 43008
• 代理人: 陳暉

1.一種用于檢測艱難梭菌基因的引物組合物，其特征在于，所述引物組合物為用于檢測gluD基因的引物組合物、用于檢測tcdA基因的引物組合物、用于檢測tcdB基因的引物組合物、用于檢測cdtA基因的引物組合物和用于檢測cdtB基因的引物組合物中的一種或多種；

所述用于檢測gluD基因的引物組合物包括gluD-F3、gluD-B3、gluD-FIP、gluD-BIP，所述gluD-F3的DNA序列如SEQ ID NO.1所示，所述gluD-B3的DNA序列如SEQ ID NO.2所示，所述gluD-FIP的DNA序列如SEQ ID NO.3所示，所述gluD-BIP的DNA序列如SEQ ID NO.4所示；

所述用于檢測tcdA基因的引物組合物包括tcdA-F3、tcdA-B3、tcdA-FIP、tcdA-BIP，所述tcdA-F3的DNA序列如SEQ ID NO.5所示，所述tcdA-B3的DNA序列如SEQ ID NO.6所示，所述tcdA-FIP的DNA序列如SEQ ID NO.7所示，所述tcdA-BIP的DNA序列如SEQ ID NO.8所示；

所述用于檢測tcdB基因的引物組合物包括tcdB-F3、tcdB-B3、tcdB-FIP、tcdB-BIP，所述tcdB-F3的DNA序列如SEQ ID NO.9所示，所述tcdB-B3的DNA序列如SEQ ID NO.10所示，所述tcdB-FIP的DNA序列如SEQ ID NO.11所示，所述tcdB-BIP的DNA序列如SEQ ID NO.12所示；

所述用于檢測cdtA基因的引物組合物包括cdtA-F3、cdtA-B3、cdtA-FIP、cdtA-BIP，所述cdtA-F3的DNA序列如SEQ ID NO.13所示，所述cdtA-B3的DNA序列如SEQ ID NO.14所示，所述cdtA-FIP的DNA序列如SEQ ID NO.15所示，所述cdtA-BIP的DNA序列如SEQ ID NO.16所示；

所述用于檢測cdtB基因的引物組合物包括cdtB-F3、cdtB-B3、cdtB-FIP、cdtB-BIP，所述cdtB-F3的DNA序列如SEQ ID NO.17所示，所述cdtB-B3的DNA序列如SEQ ID NO.18所示，所述cdtB-FIP的DNA序列如SEQ ID NO.19所示，所述cdtB-BIP的DNA序列如SEQ ID NO.20所示。

2.一種試劑盒，其特征在于，包括權利要求1所述的引物組合物、dNTP、聚合酶、反應緩沖液、熒光試劑。

3.根據權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，還包括甜菜堿、MgSO₄和KCl。

4.根據權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述熒光試劑為SYBR Green I。

5.根據權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述引物組合物中，gluD-FIP和gluD-BIP︰gluD-F3和gluD-B3的摩爾比為4︰1；

和/或，tcdA-FIP和tcdA-BIP︰tcdA-F3和tcdA-B3的摩爾比為4︰1；

和/或，tcdB-FIP和tcdB-BIP︰tcdB-F3和tcdB-B3的摩爾比為4︰1；

和/或，cdtA-FIP和cdtA-BIP︰cdtA-F3和cdtA-B3的摩爾比為4︰1；

和/或，cdtB-FIP和cdtB-BIP︰cdtB-F3和cdtB-B3的摩爾比為4︰1。

6.根據權利要求2至5中任一項所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中，所述dNTP的濃度為1.2mM，所述聚合酶為8U Bst DNA聚合酶，所述反應緩沖液為1X Thermopol反應緩沖液，所述甜菜堿的濃度為1M，所述MgSO₄的濃度為3.2mM、所述KCl的濃度為12mM，所述熒光染料為0.8X SYBR Green I。

7.一種權利要求2至6中任一項所述試劑盒在艱難梭菌的LAMP檢測中的應用。