[發(fā)明專利]一種L-天冬氨酸-α-脫羧酶突變體及其應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811600551.6
• 申請日: 2018-12-26
• 公開（公告）號: CN109735522B
• 公開（公告）日: 2021-02-02
• 發(fā)明（設計）人: 于欣君;陳虹;汪釗
• 申請（專利權）人: 浙江工業(yè)大學
• 主分類號: C12N9/88
• 分類號: C12N9/88;C12N15/60;C12N15/70;C12N1/21;C12P13/06;C12R1/19
• 代理公司: 杭州天正專利事務所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;李世玉

1.一種L-天冬氨酸-α-脫羧酶突變體，其特征在于所述L-天冬氨酸-α-脫羧酶突變體為下列之一：（1）SEQ ID NO.1所示氨基酸第469位的絲氨酸突變?yōu)楦彼幔唬?）SEQ ID NO.1所示氨基酸第98位的精氨酸突變?yōu)榻M氨酸、第305位賴氨酸突變?yōu)楣劝彼幔唬?）SEQ ID NO.1所示氨基酸第98位的精氨酸突變?yōu)榻M氨酸、第305位賴氨酸突變?yōu)楣劝彼帷⒌?51位的異亮氨酸突變?yōu)槔i氨酸。

2.一種權利要求1所述L-天冬氨酸-α-脫羧酶突變體編碼基因。

3.一種由權利要求2所述編碼基因構建的工程菌。

4.一種權利要求1所述L-天冬氨酸-α-脫羧酶突變體在轉化L-天冬氨酸生產β-丙氨酸中的應用，其特征在于所述的應用為：以含L-天冬氨酸-α-脫羧酶突變體基因的如權利要求3所述的工程菌經誘導培養(yǎng)獲得的濕菌體為催化劑，以L-天冬氨酸為底物，以pH7.0磷酸鹽緩沖液為反應介質構成轉化體系，在37℃、200rpm條件下進行轉化反應，反應完全后，獲得β-丙氨酸轉化液，分離提取，獲得β-丙氨酸。

5.如權利要求4所述的應用，其特征在于所述轉化體系中，催化劑加入量以濕菌體重量計為1-10g/L，所述底物終濃度為50-100 g/L。

6.如權利要求4所述的應用，其特征在于所述催化劑按如下方法制備：將含L-天冬氨酸-α-脫羧酶突變體基因的如權利要求3所述的工程菌接種于含100μg/mL卡那霉素的LB培養(yǎng)基中，37℃，200r/min振蕩培養(yǎng)12h；獲得種子液；將種子液以體積濃度2%接種量轉接于含100μg/mL卡那霉素的LB培養(yǎng)基中，在37℃，200r/min下培養(yǎng)至OD₆₀₀在0.6-0.8，加入終濃度0.2 mM異丙基硫代半乳糖苷，然后30℃，200r/min誘導表達培養(yǎng)12h，在4℃下10000 rpm離心10 min，收集菌體細胞。