[發(fā)明專利]一種人原代骨巨細胞瘤細胞株GCTB28-luc及其構(gòu)建方法和應(yīng)用在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201811600363.3 | 申請日： | 2018-12-26 |
| 公開（公告）號： | CN109749998A | 公開（公告）日： | 2019-05-14 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 周振華;肖建如;李焱;張薇薇;龔德軍;匡牧宇;曹佳實;賈奇;胡碩;王旭東;陳素 | 申請（專利權(quán)）人： | 中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)第二附屬醫(yī)院 |
| 主分類號： | C12N5/09 | 分類號： | C12N5/09;C12Q1/02;A01K67/027;C12R1/91 |
| 代理公司： | 上海申浩律師事務(wù)所 31280 | 代理人： | 龔敏 |
| 地址： | 200003 *** | 國省代碼： | 上海;31 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 巨細胞瘤 細胞株 代骨 骨巨細胞瘤 保藏 構(gòu)建 體外培養(yǎng) 應(yīng)用 中國典型培養(yǎng)物 個體化治療 發(fā)病機制 機理模型 連續(xù)傳代 體外研究 細胞材料 腫瘤細胞 培養(yǎng)基 可用 制備 篩選 生長 | ||
一種人原代骨巨細胞瘤細胞株GCTB28?luc及其構(gòu)建方法和應(yīng)用，所述人原代骨巨細胞瘤細胞株GCTB28保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，地址：中國武漢市武漢大學(xué)，保藏號為CCTCC NO：C2018178。本發(fā)明構(gòu)建的細胞株GCTB28?luc具有人原代骨巨細胞瘤腫瘤細胞的特性，符合建系標(biāo)準(zhǔn)，可在培養(yǎng)基中進行體外培養(yǎng)，且體外培養(yǎng)生長穩(wěn)定、能連續(xù)傳代，進而方便可用于建立骨巨細胞瘤發(fā)生機理模型，可作為骨巨細胞瘤發(fā)病機制及個體化治療體外研究的細胞材料，可應(yīng)用于制備、篩選、評價抗骨巨細胞瘤藥物。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種人原代骨巨細胞瘤細胞株GCTB28-luc及其構(gòu)建方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)
骨巨細胞瘤是亞洲地區(qū)最常見的原發(fā)骨腫瘤之一，占所有原發(fā)骨腫瘤的13-15％，是一種非常特殊的原發(fā)骨腫瘤，其生物學(xué)特性介于良惡性之間，WHO(世界衛(wèi)生組織)將其歸于良性的骨腫瘤，但與良性腫瘤相比，骨巨細胞瘤具有更高的侵襲性，容易復(fù)發(fā)，也可以轉(zhuǎn)移，但是轉(zhuǎn)移甚為罕見，轉(zhuǎn)移部位多為肺部。與惡性腫瘤相比，骨巨細胞具有相對較好的預(yù)后，但值得注意的是對化療和放療似乎都不夠敏感。更值得注意的是骨巨細胞瘤的細胞學(xué)組成十分復(fù)雜，是由多核細胞、基質(zhì)細胞和單核細胞三種細胞構(gòu)成，而這三種細胞在腫瘤發(fā)生中扮演的角色及相互之間聯(lián)系仍然未能完全揭曉。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于提供一種人原代骨巨細胞瘤細胞株GCTB28-luc及其構(gòu)建方法和應(yīng)用，該新型人原代骨巨細胞瘤細胞株GCTB28-luc可為研究病人體內(nèi)骨巨細胞瘤的發(fā)生、耐藥機制及治療提供良好的體外模型，進而促進骨巨細胞瘤的基礎(chǔ)研究、預(yù)防及臨床診治。
為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是：
本發(fā)明從大量的骨巨細胞瘤病例中進行了多次原代培養(yǎng)，并對動物移植瘤的方法進行了探索，建成了能夠穩(wěn)定傳代并在免疫缺陷小鼠中致瘤的亞裔人來源的骨巨細胞瘤細胞株，相信細胞株能夠為進一步研究骨巨細胞瘤的發(fā)生機制及制定相對的治療策略提供良好的基礎(chǔ)。
一種人原代骨巨細胞瘤細胞株GCTB28-luc，所述人原代骨巨細胞瘤細胞株GCTB28保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，地址：中國武漢市武漢大學(xué)，保藏日期：2018.10.24，保藏號為CCTCC NO：C2018178。
本發(fā)明所述的人原代骨巨細胞瘤細胞株GCTB28-luc的構(gòu)建方法，其包括如下步驟：
1)將骨巨細胞瘤患者手術(shù)切除后的腫瘤標(biāo)本采用常規(guī)修剪去除腫瘤組織周圍的壞死及非腫瘤組織，生理鹽水反復(fù)沖洗，無菌外科剪將腫瘤組織剪碎，置于50ml含10％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液中，按培養(yǎng)液體積加入II型膠原酶10mg/ml后置于37℃恒溫振蕩箱中以150轉(zhuǎn)/分鐘振蕩2h；
2)將消化后的組織標(biāo)本取出，用300目金屬篩網(wǎng)過篩，將過篩網(wǎng)的液體緩慢注入預(yù)置好Ficoll淋巴分離液的離心管中，2500轉(zhuǎn)/min離心30min后，收集中間層細胞，PBS重懸后1000轉(zhuǎn)/min離心5min，棄上清液，DMEM重懸后調(diào)整細胞密度，以1×106個/L濃度接種于25cm培養(yǎng)瓶中，放入37℃含5％CO2和95％空氣的細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；用0.25％的胰酶消化傳代；
3)將傳代后的細胞接種于新的細胞培養(yǎng)瓶中，加入DMEM培養(yǎng)基進行培養(yǎng)；在培養(yǎng)的過程中，挑選不同代數(shù)的細胞進行凍存保種，收集細胞后將細胞用凍存液重懸，將凍存管放入液氮罐中保存，將該細胞系命名為GCTB28；
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