[發明專利]一種人原代骨巨細胞瘤細胞株GCTB28-luc及其構建方法和應用

在審

• 申請號: 201811600363.3
• 申請日: 2018-12-26
• 公開（公告）號: CN109749998A
• 公開（公告）日: 2019-05-14
• 發明（設計）人: 周振華;肖建如;李焱;張薇薇;龔德軍;匡牧宇;曹佳實;賈奇;胡碩;王旭東;陳素
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第二軍醫大學第二附屬醫院
• 主分類號: C12N5/09
• 分類號: C12N5/09;C12Q1/02;A01K67/027;C12R1/91
• 代理公司: 上海申浩律師事務所 31280
• 代理人: 龔敏

1.一種人原代骨巨細胞瘤細胞株GCTB28-luc，其特征在于，所述人原代骨巨細胞瘤細胞株GCTB28-luc保藏于中國典型培養物保藏中心，地址：中國武漢市武漢大學，保藏日期：2018.10.24，保藏號：CCTCC NO：C2018178。

2.如權利要求1所述的人原代骨巨細胞瘤細胞株GCTB28的構建方法，包括如下步驟：

1)將骨巨細胞瘤患者手術切除后的腫瘤標本采用常規修剪去除腫瘤組織周圍的壞死及非腫瘤組織，生理鹽水反復沖洗，無菌外科剪將腫瘤組織剪碎，置于50ml含10％胎牛血清的DMEM液中，按培養液體積加入II型膠原酶10mg/ml后置于37℃恒溫振蕩箱中以150轉/分鐘振蕩2h；

2)將消化后的組織標本取出，用300目金屬篩網過篩，將過篩網的液體緩慢注入預置好Ficoll淋巴分離液的離心管中，2500轉/min離心30min后，收集中間層細胞，PBS重懸后1000轉/min離心5min，棄上清液，DMEM重懸后調整細胞密度，以1×10⁶個/L濃度接種于25cm培養瓶中，放入37℃含5％CO₂和95％空氣的細胞培養箱中培養；用0.25％的胰酶消化傳代；

3)將傳代后的細胞接種于新的細胞培養瓶中，加入DMEM培養基進行培養；在培養的過程中，挑選不同代數的細胞進行凍存保種，收集細胞后將細胞用凍存液重懸，將凍存管放入液氮罐中保存，將該細胞系命名為GCTB28；

4)將熒光素酶基因整合到細胞GCTB28染色體DNA上，使細胞表達熒光素酶，構建出穩定表達熒光素酶的細胞株，命名為GCTB28-luc，得保藏編號為CCTCC NO：C2018178的人原代骨肉瘤細胞株。

3.如權利要求2所述的構建方法，其特征在于，步驟5)中，所述DMEM培養基含有10％胎牛血清、100U/ml青霉素、100mg/ml鏈霉素。

4.如權利要求1所述的人原代骨巨細胞瘤細胞株GCTB28-luc在建立體外的人骨巨細胞瘤免疫缺陷動物模型中的應用。

5.如權利要求1所述的人原代骨巨細胞瘤細胞株GCTB28-luc在建立人骨巨細胞瘤發生機理模型中的應用。

6.如權利要求1所述的人原代骨巨細胞瘤細胞株GCTB28-luc在制備抗人骨巨細胞瘤藥物中的應用。

7.如權利要求1所述的人原代骨巨細胞瘤細胞株GCTB28-luc在篩選抗人骨巨細胞瘤藥物中的應用。

8.如權利要求1所述的人原代骨巨細胞瘤細胞株GCTB28-luc在評價抗人骨巨細胞瘤藥物中的應用。