[發(fā)明專利]一種人原代骨巨細胞瘤細胞株GCTB28-luc及其構建方法和應用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811600363.3
• 申請日: 2018-12-26
• 公開（公告）號: CN109749998A
• 公開（公告）日: 2019-05-14
• 發(fā)明（設計）人: 周振華;肖建如;李焱;張薇薇;龔德軍;匡牧宇;曹佳實;賈奇;胡碩;王旭東;陳素
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學第二附屬醫(yī)院
• 主分類號: C12N5/09
• 分類號: C12N5/09;C12Q1/02;A01K67/027;C12R1/91
• 代理公司: 上海申浩律師事務所 31280
• 代理人: 龔敏

1.一種人原代骨巨細胞瘤細胞株GCTB28-luc，其特征在于，所述人原代骨巨細胞瘤細胞株GCTB28-luc保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，地址：中國武漢市武漢大學，保藏日期：2018.10.24，保藏號：CCTCC NO：C2018178。

2.如權利要求1所述的人原代骨巨細胞瘤細胞株GCTB28的構建方法，包括如下步驟：

1)將骨巨細胞瘤患者手術切除后的腫瘤標本采用常規(guī)修剪去除腫瘤組織周圍的壞死及非腫瘤組織，生理鹽水反復沖洗，無菌外科剪將腫瘤組織剪碎，置于50ml含10％胎牛血清的DMEM液中，按培養(yǎng)液體積加入II型膠原酶10mg/ml后置于37℃恒溫振蕩箱中以150轉/分鐘振蕩2h；

2)將消化后的組織標本取出，用300目金屬篩網過篩，將過篩網的液體緩慢注入預置好Ficoll淋巴分離液的離心管中，2500轉/min離心30min后，收集中間層細胞，PBS重懸后1000轉/min離心5min，棄上清液，DMEM重懸后調整細胞密度，以1×10⁶個/L濃度接種于25cm培養(yǎng)瓶中，放入37℃含5％CO₂和95％空氣的細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；用0.25％的胰酶消化傳代；

3)將傳代后的細胞接種于新的細胞培養(yǎng)瓶中，加入DMEM培養(yǎng)基進行培養(yǎng)；在培養(yǎng)的過程中，挑選不同代數的細胞進行凍存保種，收集細胞后將細胞用凍存液重懸，將凍存管放入液氮罐中保存，將該細胞系命名為GCTB28；

4)將熒光素酶基因整合到細胞GCTB28染色體DNA上，使細胞表達熒光素酶，構建出穩(wěn)定表達熒光素酶的細胞株，命名為GCTB28-luc，得保藏編號為CCTCC NO：C2018178的人原代骨肉瘤細胞株。

3.如權利要求2所述的構建方法，其特征在于，步驟5)中，所述DMEM培養(yǎng)基含有10％胎牛血清、100U/ml青霉素、100mg/ml鏈霉素。

4.如權利要求1所述的人原代骨巨細胞瘤細胞株GCTB28-luc在建立體外的人骨巨細胞瘤免疫缺陷動物模型中的應用。

5.如權利要求1所述的人原代骨巨細胞瘤細胞株GCTB28-luc在建立人骨巨細胞瘤發(fā)生機理模型中的應用。

6.如權利要求1所述的人原代骨巨細胞瘤細胞株GCTB28-luc在制備抗人骨巨細胞瘤藥物中的應用。

7.如權利要求1所述的人原代骨巨細胞瘤細胞株GCTB28-luc在篩選抗人骨巨細胞瘤藥物中的應用。

8.如權利要求1所述的人原代骨巨細胞瘤細胞株GCTB28-luc在評價抗人骨巨細胞瘤藥物中的應用。