[發明專利]一種內皮祖細胞的培養方法在審
| 申請號： | 201811599511.4 | 申請日： | 2018-12-26 |
| 公開（公告）號： | CN109456936A | 公開（公告）日： | 2019-03-12 |
| 發明（設計）人： | 陳海佳;葛嘯虎;張夢晨;王小燕;李學家 | 申請（專利權）人： | 廣州賽萊拉干細胞科技股份有限公司 |
| 主分類號： | C12N5/071 | 分類號： | C12N5/071;C12N5/078 |
| 代理公司： | 北京集佳知識產權代理有限公司 11227 | 代理人： | 張雪嬌;趙青朵 |
| 地址： | 510000 廣東省廣州市開發區廣*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 內皮祖細胞 培養基 堿性成纖維細胞生長因子 血管內皮生長因子 細胞生長 微載體 擴增 培養液 培養基利用率 單個核細胞 檢測和控制 細胞 環境因素 培養系統 貼壁培養 細胞接種 細胞收獲 重現性 產率 消化 | ||
1.一種內皮祖細胞的培養方法，其特征在于，包括：
S1)將單個核細胞進行貼壁培養，消化后，得到擴增后的細胞；
S2)將所述擴增后的細胞接種于培養基中，進行培養，得到內皮祖細胞；所述培養基中包括堿性成纖維細胞生長因子、血管內皮生長因子與微載體。
2.根據權利要求1所述的培養方法，其特征在于，所述步驟S2)培養基中擴增后的細胞密度為1×104～1×106cells/ml。
3.根據權利要求1所述的培養方法，其特征在于，所述步驟S2)培養基中堿性成纖維細胞生長因子與血管內皮生長因子的濃度各自獨立地為10～50ng/ml。
4.根據權利要求3所述的培養方法，其特征在于，所述步驟S2)培養基中堿性成纖維細胞生長因子與血管內皮生長因子的濃度各自獨立地為10～30ng/ml。
5.根據權利要求1所述的培養方法，其特征在于，所述步驟S2)培養基中微載體的濃度為0.001～0.02g/ml。
6.根據權利要求1所述的培養方法，其特征在于，所述步驟S2)中培養的溫度為36℃～37℃，CO2的體積濃度為3％～10％。
7.根據權利要求1所述的培養方法，其特征在于，所述步驟S2)中培養具體為：
10～20轉/分鐘，培養1～3h，然后25～35轉/分鐘培養至第2天，補加培養基，再以40～60轉/分鐘進行培養。
8.根據權利要求7所述的培養方法，其特征在于，所述步驟S2)中培養具體為：
13～18轉/分鐘，培養1.5～2.5h，然后28～32轉/分鐘培養至第2天，補加培養基，再以45～55轉/分鐘進行培養。
9.根據權利要求7所述的培養方法，其特征在于，所述補加培養基的量為原始培養基體積的1/10～1/5。
10.根據權利要求1所述的培養方法，其特征在于，所述步驟S2)中培養結束后，離心，用胰蛋白酶-EDTA消化液消化，終止消化后，離心去除上清，用磷酸鹽緩沖液重懸沉淀后，過濾，得到內皮祖細胞。
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