[發明專利]一種具有熱恢復特性的新型殼聚糖酶CsnM及其應用

有效

• 申請號: 201811596664.3
• 申請日: 2018-12-26
• 公開（公告）號: CN109486804B
• 公開（公告）日: 2020-09-01
• 發明（設計）人: 李尚勇;韓彥弢;周宇
• 申請（專利權）人: 青島大學
• 主分類號: C12N9/88
• 分類號: C12N9/88;C12N15/56;C12P19/26;C12P19/12
• 代理公司: 濟南知來知識產權代理事務所(普通合伙) 37276
• 代理人: 于志波;曹麗

本發明涉及一種具有熱恢復特性的內切型殼聚糖酶CsnM及其應用。所述殼聚糖酶CsnM氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本發明所述的殼聚糖酶產量可達680.2U/mL，最適反應溫度為40℃，具有熱恢復特性，在煮沸10min后，在冰水中孵育30min，可恢復89.1％的活性。該酶作用方式為內切，降解主產物為殼二糖和殼三糖。本發明所述的殼聚糖酶產量大，性質新穎，具有優良的工業化應用潛質。

技術領域

本發明涉及一種具有熱恢復特性的內切型殼聚糖酶CsnM及其應用，屬于生物技術領域。

背景技術

殼寡糖是殼聚糖經水解后聚合度小于20，分子量小于3900的寡糖，是由N-乙酰-D-氨基葡萄糖(GLcNAc)和D-氨基葡萄糖(GLcN)通過β-l,4-糖苷鍵連接而成。由于更低的分子量、更好的溶解性使得殼寡糖相較殼聚糖有著更為廣泛的應用。此外，殼寡糖還具備抗腫瘤、降血壓、增強免疫力等獨特的藥理功能活性，這使得殼寡糖在醫藥、保健品、食品、養殖等領域有了更大的應用價值。

殼聚糖能被多類酶水解。包括非專一性酶類：脂肪酶、蛋白酶、碳水化合物分解酶等，能將殼聚糖水解成聚合度低的殼寡糖。但是非專一性酶類水解到一定程度時，加大酶量也難以提高水解程度，而且水解產物較復雜、難以分離。而使用殼聚糖酶(EC：3.2.1.132)水解殼聚糖來制備寡糖的方法具有反應條件溫和、反應過程容易控制等優點，且產物純度較高，利用基因工程構建高產殼聚糖酶的工程菌是工業化制備殼寡糖的有效途徑。目前，報道的殼聚糖酶活力較低，且熱穩定性和儲存穩定行較差，嚴重限制了其工業化應用前景。

發明內容

本發明針對現有技術的不足，提供了一種新型殼聚糖酶CsnM及其制備方法。本發明所述殼聚糖酶CsnM的最適反應溫度為40℃，最適反應pH為5.9；其具有熱恢復的特性，酶液煮沸10min后，放置在冰水中(0℃)孵育30min，可恢復其89.1％的活性，利于解決運輸過程中酶的穩定性問題。該酶降解方式為內切，酶解主產物為殼二糖和殼三糖。

一方面，本發明提供一種新型殼聚糖酶CsnM，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

SEQ ID NO.1：

MKLSCIASFKWHAKVLSLLELGAPVPNLRTRTVAVAVGGLLIASGAIAGTAAQANAVSSLAPAITAVSAASTGDLSAPAKKEIAMQLVCSAENSSLDWKAQYGYIEDIDDDRGYTGGIIGFTSGTGDMLELVQNYANTKPDNNVLKPFLPVLRKVNGTKSHEGLGQKYVDAWHQAAKDSVFLKEQDKLRDSMYFNPAVSQGKDSNMSNLGQFMYYDAIFMHGPGDSSDSFGGIRKSAMKNAYTAAAQGGDEKTYLQAFATARKKIMKQENAHSDTSRVDDAQLKFLNEGNYDLHTLGKWKVYGDPYEIK

另一方面，本發明還提供一種新型殼聚糖酶CsnM對應的核酸序列，如SEQ ID NO.2所示。

SEQ ID NO.2：