[發明專利]一株米曲霉BLCY-006及其在制備低聚半乳糖中的應用

有效

• 申請號: 201811596603.7
• 申請日: 2018-12-26
• 公開（公告）號: CN109439552B
• 公開（公告）日: 2020-01-21
• 發明（設計）人: 李方華;干昭波;竇光朋;邵先豹;張明站;杜倩;楊騰騰
• 申請（專利權）人: 山東百龍創園生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N9/38;C12P19/00;C12P19/14;C12R1/69
• 代理公司: 37219 濟南金迪知識產權代理有限公司
• 代理人: 陳桂玲

1.一株米曲霉(Aspergillus oryzae)BLCY-006，2018年12月5日保存于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號CGMCC No.16965，地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所。

2.權利要求1所述的米曲霉(Aspergillus oryzae)BLCY-006的培養方法，其特征在于，步驟如下：

(1)取米曲霉(Aspergillus oryzae)BLCY-006接種于固體培養基中，在28～35℃的條件下，活化培養20～30h，制得活化菌株；

(2)取步驟(1)制得的活化菌株，接種于種子培養基中，在28～35℃的條件下，增殖培養20～30h，制得種子液；

(3)取步驟(2)制得的種子液，按體積比2～10％的比例接種于發酵培養基中，在28～35℃，擴大培養25～35h，即得菌體發酵液。

3.如權利要求2所述的培養方法，其特征在于，步驟(2)中所述種子培養基組分如下，均為重量百分比：

硝酸銨0.2％；硫酸銨0.1％；磷酸二氫鉀0.1％；尿素0.05％；蛋白胨1％；蔗糖2％；葡萄糖5％，余量水，pH為4.5～6.5。

4.如權利要求2所述的培養方法，其特征在于，步驟(3)中所述發酵培養基組分如下，均為重量百分比：

蔗糖5％，葡萄糖5％，蛋白胨1％，硫酸銨0.1％；磷酸二氫鉀0.1％，余量水。

5.如權利要求2所述的培養方法，其特征在于，步驟(1)中所述固體培養基為常規PDA固體培養基。

6.權利要求1所述的米曲霉(Aspergillus oryzae)BLCY-006在制備低聚半乳糖中的應用，其特征在于，步驟如下：

(a)按照權利要求2所述的米曲霉(Aspergillus oryzae)BLCY-006的培養方法制備得到菌體發酵液，經過濾收集菌絲體；

(b)將步驟(a)收集到的菌絲體加入預冷的磷酸緩沖液然后與經過預處理的吸附劑進行反應，反應時間為5～25h，使菌絲體固定在吸附劑表面，制得β-半乳糖苷酶；

(c)配制質量濃度為40～60％的乳糖溶液，將步驟(b)得到的β-半乳糖苷酶加入到乳糖溶液中，保溫反應后12h后，制得低聚半乳糖粗溶液；

(d)將步驟(c)制得的低聚半乳糖粗溶液經脫色、過濾、離交、色譜分離、濃縮、干燥得到低聚半乳糖。

7.如權利要求6所述的應用，其特征在于，步驟(a)中所述過濾采用板框式壓濾機過濾，工作壓力為0.3～0.5MPa，流速為5～10m³/h。

8.如權利要求6所述的應用，其特征在于，步驟(b)中所述吸附劑選自氧化鋁、硅藻土、多孔陶瓷或纖維素。

9.如權利要求6所述的應用，其特征在于，步驟(c)中所述β-半乳糖苷酶的加入量，以乳糖質量計，為0.1～10wt％；所述保溫反應的溫度為30～60℃。

10.如權利要求6所述的應用，其特征在于，步驟(d)中所述脫色所需活性炭添加量為0.1wt％，脫色時間為1.5h；所述色譜分離的運行壓力為0.2MPa，溫度為60℃，水耗比1:1.2，每小時進料1.8m³。