[發明專利]人嗜肺軍團菌表面蛋白單克隆抗體及抗原捕獲ELISA試劑盒

有效

• 申請號: 201811596382.3
• 申請日: 2018-12-20
• 公開（公告）號: CN110540972B
• 公開（公告）日: 2021-04-13
• 發明（設計）人: 胡征
• 申請（專利權）人: 湖北云璐生物工程有限公司
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/12;C07K14/195;C12N15/31;C12N15/70;G01N33/569;G01N33/543;G01N33/577
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 余曉雪;王敏鋒

本發明公開了一種人嗜肺軍團菌表面蛋白單克隆抗體及抗原捕獲ELISA試劑盒。該人嗜肺軍團菌表面蛋白單克隆抗體，是由保藏編號為CCTCCNO：C2017216的雜交瘤細胞株分泌產生。該人嗜肺軍團菌表面蛋白單克隆抗體可用于檢測人嗜肺軍團菌。本發明還公開了一種基于該單克隆抗體的人嗜肺軍團菌表面蛋白捕獲ELISA試劑盒。

技術領域

本發明屬于免疫學領域，涉及一種人嗜肺軍團菌表面蛋白單克隆抗體，雜交瘤細胞株及抗原捕獲ELISA試劑盒。

背景技術

軍團菌是一種革蘭陰性致病菌，常污染水環境，引起人呼吸道急性感染，可作為生物戰劑使用。軍團菌為需氧革蘭陰性桿菌，無菌膜，不產酸，不產氣，有一至數根端鞭毛或側鞭毛，可運動。目前，軍團菌現已發現49個種，70多個血清型，其中至少有20種與人類疾病有關。常見的有嗜肺軍團菌(L.pneumophila,LP)、麥氏軍團菌、博氏軍團菌、菲氏軍團菌、杜氏軍團菌、長灘軍團菌等，其中嗜肺軍團菌是引起獲得性肺炎的重要病原菌。該菌廣泛存在于自然界水源中，還可存在于冷、熱水管道系統中。在土壤、灰塵、河水、溝渠、冷卻水、空調冷凝水、醫院用水及呼吸機等產生的氣溶膠中常可被檢出，因此能以氣溶膠方式傳播。

由于嗜肺軍團菌病暴發范圍廣，且對人類健康構成了嚴重威脅，因此越來越受到人們的關注。盡管嗜肺軍團菌在全球范圍內傳播，但可用于實驗室診斷的標準化商品試劑的種類極少。目前檢測該致病微生物的方法主要以傳統方法為主，即分離鑒定法，該方法所需時間長，一般要2-3天，準確率在25-75％之間，很難滿足快速鑒定的需要；近幾年發展起來的PCR技術，是一種快速、靈敏、特異性好的技術，但是目前該技術還是依賴于傳統方法的前增菌步驟，而增菌液中往往還有PCR抑制劑，從而影響擴增的效果。同時，該技術還需要專業的檢測設備，不適合進行床旁檢測。以抗體為基礎的免疫學檢測已成為人體病原微生物檢測不可或缺的重要技術手段。目前已發展了多種特異性免疫檢測技術，如放射免疫分析(RIA)、酶免疫分析(EIA)、熒光免疫分析(FIA)、化學發光免疫分析(CIA)、免疫沉淀反應、免疫凝集反應、ELISA檢測試劑盒、免疫膠體金試紙條、免疫乳膠檢測試劑等。其中ELISA檢測試劑盒、免疫膠體金試紙條等多種以抗體為基礎的免疫學檢測技術，以其簡便、快速、靈敏、準確、實用的特點已成為病原微生物檢測不可或缺的重要手段。因而，研究開發具有自主知識產權的病原微生物的抗體，是開發擁有自主知識產權的膠體金檢測方法等的基礎。

抗原成分的選擇是制備抗體進行特異性檢測的關鍵。PAL蛋白是嗜肺軍團菌重要的外膜蛋白質之一。Engleberge等發現來源于軍團菌感染病人的血清能特異識別軍團菌PAL，并克隆出嗜肺軍團菌相對分子質量19×10³的外膜脂蛋白基因，其中編碼PAL的基因為528bp，包含176個氨基酸，該序列中存在著特征性的22個氨基酸，與肽酶Ⅱ所識別的序列一致，提示該抗原是一種脂蛋白。但對于該外膜脂蛋白在軍團病致病機制中的作用尚不夠清楚。序列分析表明PAL基因在各型嗜肺軍團菌均具高度保守性，故PAL蛋白可以作為嗜肺軍團菌的特異性診斷抗原。利用生物信息學及免疫信息學軟件對PAL基因序列分析，去除與其它細菌相似性高的基因序列，使其與其它細菌抗原的交叉性降低，將進一步保證PAL蛋白的特異性，從而可利用其制備高特異性單克隆抗體。本研究選用具有種間特異性的表面蛋白PAL作為抗原，制備特異性良好的單克隆抗體，并將其應用于制備人嗜肺軍團菌ELISA檢測試劑盒。

發明內容

為了解決背景技術中存的上述技術問題，本發明提供了一種特異性良好以及與其他呼吸道常見病原體無交叉反應的人嗜肺軍團菌表面蛋白單克隆抗體及抗原捕獲ELISA試劑盒。

為了實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

一種產生人嗜肺軍團菌表面蛋白單克隆抗體的雜交瘤細胞株，其特征在于：所述產生人嗜肺軍團菌表面蛋白單克隆抗體的雜交瘤細胞株是由中國典型培養物保藏中心(CCTCC)保藏的保藏號是保藏編號CCTCC NO：C2017216的雜交瘤細胞株Lp-2#。