[發明專利]一種切花虎眼萬年青離體培養快繁方法

在審

• 申請號: 201811595790.7
• 申請日: 2018-12-25
• 公開（公告）號: CN109430059A
• 公開（公告）日: 2019-03-08
• 發明（設計）人: 阮繼偉;屈云慧;楊春梅;田林孟;汪國鮮;吳麗芳;單芹麗;余蓉培;李帆;吳旻
• 申請（專利權）人: 云南省農業科學院花卉研究所;玉溪云星生物科技有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 云南凌云律師事務所 53207
• 代理人: 康珉

1.一種切花虎眼萬年青離體培養快繁方法，其特征在于，該方法包括如下步驟：

(1)外植體的選擇與處理：

將選擇的切花虎眼萬年青目標品種的健康種球在4℃低溫條件下放置14～16天至種球長出0.5～1㎝萌芽，清除種球老化的干癟鱗莖皮露出肥厚部分，用手術刀片沿種球縱向從上到下將種球分割為四瓣，且不劃傷心芽，每瓣的底部帶有相應的鱗莖基部，剝離出單個完整心芽，并將各瓣剝成單片的鱗片，且各鱗片及心芽的底部均帶有相應的鱗莖基部，用清水沖洗鱗片和心芽2-3次，用濃度為0.1％w/w的HgCl₂溶液浸泡10min，無菌水沖洗3～4次,再用添加有吐溫20的2％w/w NaClO溶液浸泡10min，無菌水沖洗3～4次，在無菌操作臺上吹干其表面水分；所述添加有吐溫20的2％w/w NaClO溶液為在100毫升的2％w/w NaClO溶液中添加2滴吐溫20；

(2)無菌系建立與啟動培養：

將步驟(1)經過處理的鱗片和心芽分別接種到均盛有啟動培養基的不同培養瓶中，接種心芽的培養瓶為心芽組，接種鱗片的培養瓶為鱗片組，所述啟動培養基為：MS+6-BA 1～2mg/L+NAA 0.1mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂6.25g/L，pH為5.8～6.0；①心芽組置于光照條件：光照強度為1500～2000lx，溫度25℃±2℃，光照時間為10～12h/d，培養14～16d至心芽長大為無根植株，且無根植株的基部分化出幼芽；②鱗片組暗處理14～16d至鱗片傷口處分化出鱗莖芽點，再置于光照條件：光照強度為1500～2000lx，溫度25℃±2℃，光照時間為10～12h/d，培養28～30d至鱗片分化出幼芽；

(3)增殖培養：

將(2)心芽組中心芽抽生的葉片切成長1.3～1.5cm小塊，心芽組中除葉片以外的其余材料和鱗片組中所有材料切成帶有3-4個芽體的小塊，將所有小塊轉接到增殖培養基中培養18-20d至有芽苗長到3～4cm，增殖培養條件：光照強度為1500～2000lx，溫度25℃±2℃，光照時間為10～12h/d，增殖培養基為：1/2MS+6-BA 1mg/L+NAA 0.1mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂6.25g/L，pH為5.8～6.0；

(4)生根培養：

①切取步驟(3)中生長至3cm以上的芽體，接種到生根培養基，培養15-20d至生根，然后整瓶移至搭建有遮光率為30％的遮陽網的大棚苗床上煉苗3-5d即得組培苗，大棚內溫度18～28℃；所述生根培養基為：1/2MS+IBA 0.2mg/L+NAA 0.1mg/L+活性炭粉1g/L+蔗糖30g/L+瓊脂6.25g/L，pH為5.8～6.0，生根培養條件：光照強度為1500～2000lx,溫度25℃±2℃，光照時間為10～12h/d；

②將步驟(3)中除(4)①已經切取的3cm以上的芽體外的其余材料切成帶有3～4個芽體的小塊，且其中的葉片切成長1.3～1.5cm小塊，所有這些小塊接種到與步驟(3)相同的增殖培養基中增殖擴繁培養，培養條件與步驟(3)所述的增殖培養條件相同；之后重復步驟(4)①和步驟(4)②直至得到組培苗；

(5)組培苗移栽管理：

將步驟(4)獲得的組培苗取出、洗凈、殺菌劑消毒后移栽至盛有基質的穴盤中，用透明的塑料膜覆蓋穴盤保溫、保濕并在穴盤上方搭建遮光率為30-50％的遮陽網，于移栽的第9天～第11天揭去塑料膜和遮陽網，于移栽的第20天以后，每周噴施1000ppm平衡型大量水溶肥一次，于移栽的第40天～第50天，即得虎眼萬年青穴盤種苗；所述平衡型大量水溶肥以質量分數計含：N 20％、P₂O₅20％、K₂O 20％，B 0.10％、Cu 0.02％、Fe 0.80％、Mn 0.25％、Mo0.020％、Zn 0.08％。

2.根據權利要求1所述的切花虎眼萬年青離體培養快繁方法，其特征在于，步驟(5)中所述的基質為由珍珠巖和草炭按珍珠巖:草炭的體積比為1:2混合而成。

3.根據權利要求1所述的切花虎眼萬年青離體培養快繁方法，其特征在于，步驟(5)中所述的穴盤規格為200穴/盤的穴盤。

4.根據權利要求1所述的切花虎眼萬年青離體培養快繁方法，其特征在于，步驟(5)中所述的殺菌劑消毒是用混合殺菌劑1000～1200倍液浸泡洗凈后的組培苗2～3min，所述混合殺菌劑由30％惡霉靈水劑6重量份、50％多菌靈可濕性粉劑2重量份和50％福美雙可濕性粉劑2重量份混合而成。